| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1.前言 | 第9-22页 |
| 1.1 拟南芥简介 | 第9-10页 |
| 1.1.1 拟南芥形态特征及分布 | 第9页 |
| 1.1.2 拟南芥的模式生物 | 第9页 |
| 1.1.3 拟南芥的研究 | 第9-10页 |
| 1.2 芥子酶防御系统研究进展 | 第10-15页 |
| 1.2.1 硫代葡糖苷 | 第10-12页 |
| 1.2.2 芥子酶 | 第12-13页 |
| 1.2.3 硫代葡糖苷/芥子酶系统的各种降解产物 | 第13-14页 |
| 1.2.4 硫代葡糖苷/芥子酶系统的功能 | 第14-15页 |
| 1.3 高等植物启动子的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 启动子的结构特征 | 第15页 |
| 1.3.2 植物启动子的克隆 | 第15-17页 |
| 1.3.3 植物启动子的类型 | 第17-18页 |
| 1.4 酵母表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第18页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统的构成 | 第18-19页 |
| 1.4.3 外源基因的高效表达 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第19-21页 |
| 1.6 技术路线 | 第21-22页 |
| 2.材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 酶与生化试剂 | 第23页 |
| 2.2 常用培养基的配制 | 第23-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.3.1 拟南芥生态型Ty-0的基因克隆 | 第26-28页 |
| 2.3.2 基因启动子的时序表达特异性测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 植物表达载体构建 | 第29页 |
| 2.3.4 表达载体转化大肠杆菌 | 第29-31页 |
| 2.3.5 植物表达载体导入农杆菌 | 第31页 |
| 2.3.6 拟南芥转化 | 第31-32页 |
| 2.3.7 拟南芥转基因植株阳性检测 | 第32-33页 |
| 2.3.8 毕赤酵母中表达TGG6活性等位基因 | 第33-35页 |
| 2.3.8.1 重组表达载体pPic9k-TGG6的构建及鉴定 | 第33页 |
| 2.3.8.2 重组载体转入毕赤酵母 | 第33-34页 |
| 2.3.8.3 重组酵母阳性克隆筛选 | 第34-35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-48页 |
| 3.1 拟南芥生态型Ty-0的TGG6活性等位基因序列分析 | 第35-40页 |
| 3.1.1 拟南芥(Ty-0)总DNA的提取 | 第35页 |
| 3.1.2 拟南芥Ty-0的TGG6基因的扩增 | 第35-36页 |
| 3.1.3 拟南芥(Ty-0)总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.1.4 拟南芥Ty-0的TGG6基因的cDNA | 第36-37页 |
| 3.1.5 拟南芥生态型Ty-0活性等位基因的序列分析 | 第37-40页 |
| 3.2 拟南芥生态型Ty-0的TGG6基因在花粉中特异表达 | 第40-41页 |
| 3.3 拟南芥生态型Ty-0全长TGG6基因表达载体构建和遗传转化 | 第41-43页 |
| 3.3.1 表达载体构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 表达载体的序列测定 | 第42页 |
| 3.3.3 表达载体导入农杆菌GV3103 | 第42-43页 |
| 3.3.4 拟南芥的遗传转化 | 第43页 |
| 3.5 拟南芥转基因植株的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.5.1 抗性植株的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.5.2 T1代种子抗性分离 | 第44页 |
| 3.5.3 T2代种子纯合子筛选 | 第44-45页 |
| 3.5.4 活性等位基因TGG6在转基因植株中的表达调控 | 第45页 |
| 3.6 转基因植株的表型分析 | 第45-47页 |
| 3.6.1 活性等位基因对转基因植株株型的影响 | 第45-47页 |
| 3.7 酵母表达活性等位基因TGG6 | 第47-48页 |
| 3.7.1 表达载体构建和酵母转化 | 第47页 |
| 3.7.2 粗蛋白的SDS-PAGE检测 | 第47-48页 |
| 4.讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 关于芥子酶TGG6基因后续研究 | 第48-49页 |
| 4.2 关于农杆菌介导转化拟南芥 | 第49页 |
| 4.3 关于RT-PCR | 第49页 |
| 4.4 关于组织特异性启动子 | 第49页 |
| 4.5 关于酵母转化的注意事项 | 第49-51页 |
| 5.结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
