| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 稻瘟病和稻瘟病菌 | 第11-13页 |
| 1.1.1 稻瘟病简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 稻瘟病菌简介 | 第12-13页 |
| 1.2 稻瘟病菌的基因组测序 | 第13页 |
| 1.3 稻瘟病菌生长、发育过程中重要基因 | 第13-19页 |
| 1.3.1 分生孢子发生相关基因 | 第14-16页 |
| 1.3.2 附着孢发生和侵染相关基因 | 第16-17页 |
| 1.3.3 稻瘟病菌自溶基因 | 第17-18页 |
| 1.3.4 黑色素合成相关基因 | 第18-19页 |
| 1.4 RNA-SEQUENCE | 第19页 |
| 1.5 实验的目的意义和主要研究内容 | 第19-22页 |
| 1.5.1 目的意义 | 第19-20页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.3 主要技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-31页 |
| 2.1 植物材料、菌株、质粒、试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 培养基及试剂配方 | 第23页 |
| 2.4 提取稻瘟病菌基因组DNA和RNA | 第23-25页 |
| 2.4.1 基因组DNA的快速提取法 | 第23-24页 |
| 2.4.2 CTAB法提取稻瘟病菌基因组DNA | 第24页 |
| 2.4.3 稻瘟病菌的RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.4.4 稻瘟病菌cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.5 RNA-SEQUENCING和数据分析 | 第25-26页 |
| 2.6 稻瘟病菌原生质体的制备和转化 | 第26页 |
| 2.6.1 原生质体的制备 | 第26页 |
| 2.6.2 原生质体转化 | 第26页 |
| 2.7 转化子检测 | 第26-30页 |
| 2.7.1 转化子PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.7.2 转化子菌落表型观察 | 第28页 |
| 2.7.3 转化子的孢子计数 | 第28页 |
| 2.7.4 稻瘟病菌转化子的致病性检测 | 第28-29页 |
| 2.7.5 Quantitative Real-time PCR | 第29-30页 |
| 2.8 RGS1和CMR1启动子区的DNA | 第30页 |
| 2.9 稻瘟病菌RGS1和CMR1基因敲除载体的构建 | 第30页 |
| 2.10 稻瘟病菌RGS1和CMR1基因过表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.11 氯化铯密度梯度离心法大量提取质粒 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-50页 |
| 3.1 RNA-SEQ数据分析 | 第31-33页 |
| 3.2 RGS1和CMRl启动子区分析 | 第33-34页 |
| 3.3 RGS1和CMR1敲除载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.1 RGS1敲除载体的构建 | 第34页 |
| 3.3.2 CMR1敲除载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.4 RGS1和CMR1过表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.1 RGS1过表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.2 CMR1过表达载体的构建 | 第36页 |
| 3.5 RGS1和CMR1敲除突变体的获得 | 第36-40页 |
| 3.5.1 原生质体的制备与转化 | 第36-37页 |
| 3.5.2 RGS1敲除突变体的验证 | 第37-39页 |
| 3.5.3 CMR1敲出载体的验证 | 第39-40页 |
| 3.6 RGS1和CMR1敲除突变体的表型 | 第40-48页 |
| 3.6.1 RGS1敲除突变体的表型 | 第40-45页 |
| 3.6.2 CMR1敲除突变体的表型 | 第45-48页 |
| 3.7 RGS1、CMR1突变后某些基因的变化 | 第48-50页 |
| 3.7.1 RGS1△的qRT-PCR | 第48-49页 |
| 3.7.2 CMR1△的RT-PCR | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 稻瘟病菌的COS1基因 | 第50-51页 |
| 4.2 稻瘟病菌的RGS1基因 | 第51页 |
| 4.3 RNA-SEQ数据库及其分析 | 第51-52页 |
| 4.4 一些技术总结 | 第52页 |
| 4.5 展望 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
