| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 微丝骨架的结构及功能 | 第11-13页 |
| 1.1.1 球状肌动蛋白与纤维状肌动蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.2 微丝的装配过程 | 第12-13页 |
| 1.1.3 微丝骨架的功能 | 第13页 |
| 1.2 橡胶树中乳管细胞骨架的功能 | 第13-14页 |
| 1.3 植物肌动蛋白解聚因子(ADF)研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 ADF基因结构及蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 ADF在植物体内的生物学功能 | 第15页 |
| 1.4 细胞中肌动蛋白的观察方法 | 第15-17页 |
| 1.4.1 重酶解肌球蛋白法 | 第15页 |
| 1.4.2 荧光标记法 | 第15-16页 |
| 1.4.3 发光蛋白的应用 | 第16页 |
| 1.4.4 免疫印迹法 | 第16页 |
| 1.4.5 Lifeact荧光探针标记法 | 第16-17页 |
| 1.5 外源基因表达系统 | 第17-19页 |
| 1.5.1 粟酒裂殖酵母的生物学特性 | 第17页 |
| 1.5.2 粟酒裂殖酵母表达系统 | 第17-19页 |
| 1.5.3 昆虫细胞表达系统 | 第19页 |
| 1.5.4 哺乳动物表达系统 | 第19页 |
| 1.6 立题依据及研究意义 | 第19-20页 |
| 1.7 本项研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料及处理 | 第21-22页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 工具酶和生化试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第22-39页 |
| 2.2.1 实验材料总RNA的提取 | 第22-25页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| 2.2.3 ADF基因3'RACE扩增 | 第25-29页 |
| 2.2.4 ADF基因5'RACE片段扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.5 ADF基因cDNA全长扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.6 HbADF2基因基因组的扩增 | 第31-33页 |
| 2.2.7 HbADF2基因的启动子克隆 | 第33-35页 |
| 2.2.8 橡胶树ADF基因的半定量RT-PCR表达分析 | 第35页 |
| 2.2.9 ADF基因的真核表达及转基因酵母的形态观察 | 第35-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-55页 |
| 3.1 橡胶树总RNA提取的检测 | 第39-40页 |
| 3.2 ADF基因3′端和5′端序列的扩增 | 第40-41页 |
| 3.3 ADF基因全长cDNA序列的克隆 | 第41-43页 |
| 3.4 HBADF2基因的基因组克隆及序列分析 | 第43-44页 |
| 3.4.1 HbADF2基因组序列的扩增 | 第43页 |
| 3.4.2 基因结构分析 | 第43-44页 |
| 3.5 HBADF2基因的启动子克隆 | 第44-46页 |
| 3.5.1 基因组DNA质量检测 | 第44页 |
| 3.5.2 基因组DNA的消化 | 第44-45页 |
| 3.5.3 HbADF2基因启动子的克隆 | 第45-46页 |
| 3.6 橡胶树ADF基因的生物信息学分析 | 第46-51页 |
| 3.6.1 氨基酸序列比对及功能结构域分析 | 第46-47页 |
| 3.6.2 系统进化树分析 | 第47页 |
| 3.6.3 氨基酸理化特性预测分析 | 第47-49页 |
| 3.6.4 亚细胞定位及信号肽预测 | 第49-50页 |
| 3.6.5 HbADF2启动子区分析 | 第50-51页 |
| 3.7 橡胶树ADF基因的表达特征分析 | 第51-53页 |
| 3.7.1 激素处理(ET、JA)下ADF基因表达模式分析 | 第51-52页 |
| 3.7.2 叶片不同发育时期和不同组织中ADF基因的表达的分析 | 第52页 |
| 3.7.3 逆境条件下ADF基因表达模式分析 | 第52-53页 |
| 3.7.4 ADF基因在健康和死皮树中的表达模式分析 | 第53页 |
| 3.8 橡胶树ADF2基因在酵母中的功能分析 | 第53-55页 |
| 3.8.1 酵母表达载体构建 | 第53-54页 |
| 3.8.2 酵母表达产物的SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 3.8.3 过表达HbADF2基因酵母的表型分析 | 第54-55页 |
| 4. 结论与讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 结论 | 第55-56页 |
| 4.2 讨论 | 第56-58页 |
| 4.2.1 基因结构功能分析 | 第56页 |
| 4.2.2 基因的表达模式分析 | 第56-57页 |
| 4.2.3 ADF的功能 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
