| 中文摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 研究现状、成果 | 第18-20页 |
| 研究目的、方法 | 第20-22页 |
| 一、miRNA芯片和ChIP-seq分析揭示HCC细胞系中miR-26b-5p与Twist1的关系 | 第22-37页 |
| 1.1 对象和方法 | 第22-28页 |
| 1.1.1 实验细胞系 | 第22页 |
| 1.1.2 实验主要试剂 | 第22-24页 |
| 1.1.3 实验主要溶液的配制 | 第24页 |
| 1.1.4 实验所用引物 | 第24-26页 |
| 1.1.5 实验方法 | 第26-28页 |
| 1.1.6 统计学分析 | 第28页 |
| 1.2 结果 | 第28-34页 |
| 1.2.1 miRNA芯片中差异mi RNA的表达 | 第28-31页 |
| 1.2.2 ChIP-seq分析预测Twist1可直接调控的miRNAs | 第31-32页 |
| 1.2.3 qRT-PCR及ChIP-PCR验证mi RNA芯片和ChIP-seq分析的结果 | 第32-34页 |
| 1.3 讨论 | 第34-36页 |
| 1.3.1 HCC中，Twist1的表达上调可引起广泛的miRNAs表达变化 | 第34页 |
| 1.3.2 Twist1可直接调控miRNAs的表达 | 第34-36页 |
| 1.4 小结 | 第36-37页 |
| 二、HCC临床标本和细胞中miR-26b-5p的表达及其与Twist1表达和临床预后的关系 | 第37-44页 |
| 2.1 对象和方法 | 第37-39页 |
| 2.1.1 临床病例资料 | 第37页 |
| 2.1.2 实验所用细胞 | 第37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第38页 |
| 2.1.5 所用引物 | 第38页 |
| 2.1.6 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.1.7 统计学分析 | 第39页 |
| 2.2 结果 | 第39-42页 |
| 2.2.1 HCC组织和细胞中miR-26b-5p呈低表达，Twist1呈高表达 | 第39-41页 |
| 2.2.2 miR-26b-5p与Twist1在HCC组织标本中的表达呈现负相关 | 第41页 |
| 2.2.3 HCC组织中miR-26b-5p的低表达与肝癌早期复发和转移相关 | 第41-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-43页 |
| 2.4 小结 | 第43-44页 |
| 三、HCC细胞中miR-26b-5p对EMT发生及VM形成的影响 | 第44-65页 |
| 3.1 对象和方法 | 第44-52页 |
| 3.1.1 实验所用细胞 | 第44页 |
| 3.1.2 主要仪器与试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第45-47页 |
| 3.1.4 实验所用抗体及引物 | 第47-48页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.1.6 统计学分析 | 第51-52页 |
| 3.2 结果 | 第52-60页 |
| 3.2.1 miR-26b-5p可抑制HCC细胞EMT的发生 | 第52-54页 |
| 3.2.2 miR-26b-5p的表达可削弱HCC细胞的迁移、侵袭、粘附、增殖及克隆形成能力 | 第54-58页 |
| 3.2.3 miR-26b-5p在HCC细胞管道结构形成中起抑制作用 | 第58-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-64页 |
| 3.3.1 EMT的发生中miR-26b-5p的作用 | 第61-63页 |
| 3.3.2 miR-26b-5p对HCC细胞迁移和侵袭的影响 | 第63页 |
| 3.3.3 miR-26b-5p在HCC细胞VM形成中的作用 | 第63-64页 |
| 3.4 小结 | 第64-65页 |
| 四、HCC中，miR-26b-5p发挥功能的分子机制研究 | 第65-95页 |
| 4.1 对象和方法 | 第65-67页 |
| 4.1.1 实验对象 | 第65页 |
| 4.1.2 实验所用细胞 | 第65页 |
| 4.1.3 主要仪器与试剂 | 第65页 |
| 4.1.4 实验所用引物 | 第65-66页 |
| 4.1.5 实验方法 | 第66-67页 |
| 4.1.6 统计学分析 | 第67页 |
| 4.2 结果 | 第67-88页 |
| 4.2.1 miR-26b-5p的生物信息学分析 | 第67-69页 |
| 4.2.2 SMAD1是miR-26b-5p的靶基因， miR-26b-5p作用于SMAD1的3’-UTR并下调其表达，SMAD1上调可减弱miR-26b-5p的作用 | 第69-76页 |
| 4.2.3 SMAD1的高表达与miR-26b-5p的低表达呈现负相关关系，SMAD1的高表达促进HCC的早期复发和转移 | 第76-77页 |
| 4.2.4 miR-26b-5p通过下调靶基因SMAD1进而抑制BMP4/Smad1信号通路 | 第77-88页 |
| 4.3 讨论 | 第88-94页 |
| 4.3.1 SMAD1在miR-26b-5p发挥功能过程中的作用 | 第89-91页 |
| 4.3.2 BMP4/Smad1信号通路的调节功能 | 第91-92页 |
| 4.3.3 miR-26b-5p对BMP4/Smad1信号通路的调节 | 第92-94页 |
| 4.4 小结 | 第94-95页 |
| 五、裸鼠HCC移植瘤模型中miR-26b-5p对肿瘤细胞成瘤能力及EMT/VM形成作用的研究 | 第95-105页 |
| 5.1 对象和方法 | 第95-98页 |
| 5.1.1 实验对象 | 第95页 |
| 5.1.2 实验所用细胞 | 第95页 |
| 5.1.3 主要仪器与试剂 | 第95页 |
| 5.1.4 实验所用抗体 | 第95-96页 |
| 5.1.5 实验方法 | 第96-97页 |
| 5.1.6 统计学分析 | 第97-98页 |
| 5.2 结果 | 第98-101页 |
| 5.2.1 miR-26b-5p抑制HCC细胞的成瘤能力及移植瘤的生长 | 第98-99页 |
| 5.2.2 miR-26b-5p抑制HCC细胞裸鼠移植瘤中EMT/VM的形成 | 第99-101页 |
| 5.3 讨论 | 第101-103页 |
| 5.3.1 裸鼠移植瘤模型的构建 | 第102页 |
| 5.3.2 HCC移植瘤模型中研究miR-26b-5p的功能 | 第102-103页 |
| 5.4 小结 | 第103-105页 |
| 全文结论 | 第105-107页 |
| 论文创新点 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-123页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第123-124页 |
| 附录 | 第124-136页 |
| 综述 MicroRNA在肿瘤上皮间充质转变中的研究进展 | 第136-157页 |
| 综述参考文献 | 第145-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 个人简历 | 第158页 |
