中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
研究背景 | 第11-15页 |
参考文献 | 第12-15页 |
材料与方法 | 第15-20页 |
一 相关实验仪器 | 第15-16页 |
二 相关实验试剂 | 第16-17页 |
三 实验相关质粒 | 第17页 |
四 实验相关细胞系 | 第17页 |
五 相关溶液配置 | 第17-19页 |
六 实验动物 | 第19-20页 |
实验步骤 | 第20-29页 |
一、细胞系复苏 | 第20页 |
二、细胞系传代 | 第20页 |
三、细胞系转染 | 第20-21页 |
1、Lipofectamine 2000 转染试剂转染细胞: | 第20-21页 |
2、Effectene& | 第21页 |
四、神经前体细胞转染 | 第21页 |
五、转化 | 第21-22页 |
六、摇菌 | 第22页 |
七、质粒小提 | 第22-23页 |
八、神经前体细胞分离及培养 | 第23页 |
九、细胞粘附玻片处理 | 第23页 |
十、细胞免疫荧光染色 | 第23-24页 |
十一、MRNA逆转录 | 第24页 |
十二、实时定量PCR(QUANTITATIVE REAL-TIME PCR)检测MRNA表达 | 第24-26页 |
1、溶液的配制 | 第24页 |
2、提取RNA所用EP管、小镊子等器械准备 | 第24页 |
3、神经前体细胞RNA提取 | 第24-25页 |
4、逆转录 | 第25页 |
5、实时荧光定量PCR检测 | 第25-26页 |
十三、荧光素酶报告基因检测转录活性 | 第26-27页 |
1、细胞转染及培养 | 第26-27页 |
2、Luciferase Assay检测 | 第27页 |
十四、神经前体细胞的转染 | 第27-28页 |
十五、神经球大小和数目的检测 | 第28-29页 |
结果 | 第29-39页 |
第一部分GPR50 在神经前体细胞中表达 | 第29-30页 |
第二部分GPR50 促进神经前体细胞的自我更新 | 第30-33页 |
1、GPR50 的SIRNA能在MRNA水平有效敲减GPR50 的表达 | 第30-31页 |
2、敲减GPR50 致使形成的神经球数目减少且神经球变小 | 第31-33页 |
第三部分GPR50 不影响星型胶质细胞的分化 | 第33-34页 |
第四部分GPR50 抑制NOTCH信号通路,促进WNT/Β-CATENIN | 第34-37页 |
1、敲减GPR50 致使HES1 的MRNA表达水平上调,而TCF7L2 下调 | 第34-35页 |
2、GPR50 胞内端抑制NICD对HES1 的转录激活 | 第35页 |
3、GPR50 通过调控NGNS和CYCLIN D1 的表达,调控神经前体细胞的自我更新和分化 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-39页 |
讨论 | 第39-41页 |
参考文献 | 第41-44页 |
结论 | 第44-45页 |
展望(不足与待改进之处) | 第45-46页 |
综述 | 第46-55页 |
参考文献 | 第50-55页 |
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文 | 第55-56页 |
致谢 | 第56-57页 |