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GPR50通过调控Notch和Wnt/β-catenin信号通路促进神经前体细胞的自我更新与神经元分化

中文摘要第4-6页
Abstract第6-8页
研究背景第11-15页
    参考文献第12-15页
材料与方法第15-20页
    一 相关实验仪器第15-16页
    二 相关实验试剂第16-17页
    三 实验相关质粒第17页
    四 实验相关细胞系第17页
    五 相关溶液配置第17-19页
    六 实验动物第19-20页
实验步骤第20-29页
    一、细胞系复苏第20页
    二、细胞系传代第20页
    三、细胞系转染第20-21页
        1、Lipofectamine 2000 转染试剂转染细胞:第20-21页
        2、Effectene&第21页
    四、神经前体细胞转染第21页
    五、转化第21-22页
    六、摇菌第22页
    七、质粒小提第22-23页
    八、神经前体细胞分离及培养第23页
    九、细胞粘附玻片处理第23页
    十、细胞免疫荧光染色第23-24页
    十一、MRNA逆转录第24页
    十二、实时定量PCR(QUANTITATIVE REAL-TIME PCR)检测MRNA表达第24-26页
        1、溶液的配制第24页
        2、提取RNA所用EP管、小镊子等器械准备第24页
        3、神经前体细胞RNA提取第24-25页
        4、逆转录第25页
        5、实时荧光定量PCR检测第25-26页
    十三、荧光素酶报告基因检测转录活性第26-27页
        1、细胞转染及培养第26-27页
        2、Luciferase Assay检测第27页
    十四、神经前体细胞的转染第27-28页
    十五、神经球大小和数目的检测第28-29页
结果第29-39页
    第一部分GPR50 在神经前体细胞中表达第29-30页
    第二部分GPR50 促进神经前体细胞的自我更新第30-33页
        1、GPR50 的SIRNA能在MRNA水平有效敲减GPR50 的表达第30-31页
        2、敲减GPR50 致使形成的神经球数目减少且神经球变小第31-33页
    第三部分GPR50 不影响星型胶质细胞的分化第33-34页
    第四部分GPR50 抑制NOTCH信号通路,促进WNT/Β-CATENIN第34-37页
        1、敲减GPR50 致使HES1 的MRNA表达水平上调,而TCF7L2 下调第34-35页
        2、GPR50 胞内端抑制NICD对HES1 的转录激活第35页
        3、GPR50 通过调控NGNS和CYCLIN D1 的表达,调控神经前体细胞的自我更新和分化第35-37页
    参考文献第37-39页
讨论第39-41页
参考文献第41-44页
结论第44-45页
展望(不足与待改进之处)第45-46页
综述第46-55页
    参考文献第50-55页
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文第55-56页
致谢第56-57页

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