| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 糖 | 第13-14页 |
| 1.2 糖药物 | 第14-15页 |
| 1.3 糖疫苗 | 第15-16页 |
| 1.4 糖疫苗的免疫机理 | 第16-17页 |
| 1.5 Hib病原学 | 第17-18页 |
| 1.6 Hib流行病学特点 | 第18-19页 |
| 1.7 Hib疫苗的发展 | 第19-21页 |
| 1.7.1 Hib荚膜多糖疫苗 | 第19-20页 |
| 1.7.2 Hib结合疫苗 | 第20-21页 |
| 1.7.2.1 PRP-D结合疫苗 | 第20页 |
| 1.7.2.2 Hb-OC结合疫苗 | 第20-21页 |
| 1.7.2.3 PRP-OMP结合疫苗 | 第21页 |
| 1.7.2.4 PRP-T结合疫苗 | 第21页 |
| 1.8 其他Hib疫苗的发展 | 第21-22页 |
| 1.9 单克隆抗体技术 | 第22-23页 |
| 1.10 单克隆抗体的应用 | 第23-24页 |
| 1.11 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 半合成Hib糖结合疫苗的免疫学评价 | 第26-40页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料 | 第27-30页 |
| 2.2.1 细菌菌株,疫苗,小鼠 | 第27页 |
| 2.2.2 主要试剂以及耗材 | 第27页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 Elisa相关试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 Hib细菌培养的相关试剂 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 流感嗜血杆菌糖蛋白疫苗的合成 | 第30页 |
| 2.3.2 动物免疫 | 第30页 |
| 2.3.3 Elisa法检测血清中抗体滴度 | 第30-31页 |
| 2.3.4 Hib细菌的培养 | 第31页 |
| 2.3.5 Hib细菌的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.5.1 革兰氏染色 | 第31-32页 |
| 2.3.5.2 生化检定 | 第32页 |
| 2.3.5.3 生长因子检定 | 第32页 |
| 2.3.6 Hib细菌菌库的建立 | 第32页 |
| 2.3.7 Hib生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 2.3.8 抗血清与细菌的结合能力检测 | 第33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-38页 |
| 2.4.1 疫苗的免疫效果 | 第33-34页 |
| 2.4.2 Hib细菌的培养结果 | 第34-35页 |
| 2.4.3 Hib细菌的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.4.3.1 革兰氏染色结果 | 第35-36页 |
| 2.4.3.2 生化检定结果 | 第36页 |
| 2.4.3.3 生长因子检定实验 | 第36-37页 |
| 2.4.3.4 Hib细菌生长曲线的测定 | 第37页 |
| 2.4.4 抗血清与细菌的结合实验 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-40页 |
| 第三章 单克隆抗体的制备以及体外杀菌活性研究 | 第40-60页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-43页 |
| 3.2.1 实验细胞及动物 | 第40页 |
| 3.2.2 试验试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 3.2.3 主要仪器及其型号 | 第41页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第41-43页 |
| 3.2.4.1 细胞培养相关试剂的配制 | 第41页 |
| 3.2.4.2 SDS-PAGE缓冲液 | 第41-43页 |
| 3.2.4.3 Western blot相关试剂配制 | 第43页 |
| 3.2.4.4 多聚赖氨酸溶液配制 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-51页 |
| 3.3.1 小鼠骨髓瘤细胞的培养 | 第43-45页 |
| 3.3.1.1 细胞的冻存 | 第43-44页 |
| 3.3.1.2 细胞复苏 | 第44页 |
| 3.3.1.3 细胞传代 | 第44页 |
| 3.3.1.4 细胞收集与计数 | 第44-45页 |
| 3.3.2 单克隆抗体的制备 | 第45-47页 |
| 3.3.2.1 加强免疫 | 第45页 |
| 3.3.2.2 脾细胞的制备 | 第45页 |
| 3.3.2.3 小鼠骨髓瘤细胞的准备 | 第45-46页 |
| 3.3.2.4 细胞融合 | 第46页 |
| 3.3.2.5 杂交瘤细胞的筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.2.6 杂交瘤细胞的克隆化 | 第47页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第47-48页 |
| 3.3.4 单克隆抗体分型试剂盒检测所得单克隆抗体的亚型 | 第48页 |
| 3.3.4.1 样品准备与处理 | 第48页 |
| 3.3.4.2 抗体分型检测 | 第48页 |
| 3.3.5 单克隆抗体的大量制备 | 第48-49页 |
| 3.3.6 单克隆抗体抗体亚型的验证 | 第49-50页 |
| 3.3.6.1 SDS-PAGE检测 | 第49页 |
| 3.3.6.2 Western blot | 第49-50页 |
| 3.3.7 单克隆抗体的“杀菌力”实验 | 第50-51页 |
| 3.3.7.1 细菌菌落形成单位(CFU)的确定 | 第50页 |
| 3.3.7.2 腹水中IgM“杀菌”力实验 | 第50-51页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第51-59页 |
| 3.4.1 制备单克隆抗体的实验结果 | 第51-52页 |
| 3.4.2 杂交瘤细胞染色体分析结果 | 第52-53页 |
| 3.4.3 单克隆抗体亚型鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.4.4 大量制备单克隆抗体结果 | 第54页 |
| 3.4.5 单克隆抗体抗体亚型的验证结果 | 第54-59页 |
| 3.4.5.1 SDS-PAGE实验结果 | 第54-55页 |
| 3.4.5.2 Western blot实验结果 | 第55-57页 |
| 3.4.5.3 细菌菌落形成单位(CFU)的确定 | 第57页 |
| 3.4.5.4 腹水中IgM抗体的“杀菌”活性 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士期间发表的学位论文 | 第68-69页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第69页 |