| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-24页 |
| 1.1 前言 | 第17-18页 |
| 1.2 WNT信号通路 | 第18-24页 |
| 1.2.1 Wnt蛋白 | 第18页 |
| 1.2.2 Wnt蛋白合成及分泌途径 | 第18-20页 |
| 1.2.3 Wnt信号转导途径 | 第20-21页 |
| 1.2.4 Wnt信号通路作用 | 第21-22页 |
| 1.2.5 Wnt信号通路抑制剂及其应用 | 第22-24页 |
| 第二章 C59对日本血吸虫WNT信号通路的抑制初探 | 第24-49页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1 实验动物及虫株 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 不同期别及性别日本血吸虫的收集 | 第24-25页 |
| 2.2.2 总RNA的提取、cDNA的合成及总蛋白的抽提 | 第25-26页 |
| 2.2.3 C59的配制 | 第26页 |
| 2.2.4 日本血吸虫Wnt信号通路成员及内参基因的实时定量PCR引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.5 C59最佳作用浓度的确定 | 第27-28页 |
| 2.2.6 20 nmol/L C59作用不同时间对Wnt信号通路成员基因抑制效果的比较 | 第28页 |
| 2.2.7 C59作用体外培养的7天及14天虫体时引起的Wnt信号通路成员基因mRNA水平变化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 Wnt信号通路抑制的7天及14天虫体中细胞凋亡通路相关基因mRNA水平变化 | 第29页 |
| 2.2.9 Wnt信号通路抑制的14天虫体的扫描电镜及透射电镜观察 | 第29页 |
| 2.2.10 C59对宿主体内血吸虫的作用分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-46页 |
| 2.3.1 C59最佳作用浓度的确定 | 第30-35页 |
| 2.3.2 20 nmol/L C59作用不同时间对Wnt信号通路成员基因抑制效果的比较 | 第35-37页 |
| 2.3.3 20 nmol/L C59作用于体外培养的7天及14天虫体引起的Wnt信号通路成员基因mRNA水平变化 | 第37-40页 |
| 2.3.4 Wnt信号通路抑制的7天及14天虫体中细胞凋亡通路相关基因mRNA水平变化 | 第40-42页 |
| 2.3.5 Wnt信号通路抑制的14天虫体的扫描电镜观察 | 第42-44页 |
| 2.3.6 Wnt信号通路抑制的14天虫体的透射电镜观察 | 第44-45页 |
| 2.3.7 C59对宿主体内血吸虫的作用分析 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-49页 |
| 2.4.1 C59最佳作用浓度的确定 | 第46页 |
| 2.4.2 20 nmol/L C59作用不同时间对Wnt信号通路成员基因抑制效果的比较 | 第46-47页 |
| 2.4.3 C59作用体外培养的7天及14天虫体时引起的Wnt信号通路成员基因mRNA水平变化 | 第47页 |
| 2.4.4 Wnt信号通路抑制的7天及14天虫体中细胞凋亡通路相关基因mRNA水平变化 | 第47-48页 |
| 2.4.5 Wnt信号通路抑制的14天虫体的扫描电镜及透射电镜观察 | 第48页 |
| 2.4.6 C59对宿主体内血吸虫的作用分析 | 第48-49页 |
| 第三章 日本血吸虫PORCN基因的克隆、表达及RNA干扰分析 | 第49-62页 |
| 3.1 材料 | 第49页 |
| 3.1.1 实验动物及虫株 | 第49页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 3.2 方法 | 第49-54页 |
| 3.2.1 不同期别及性别日本血吸虫的收集 | 第49页 |
| 3.2.2 总RNA的提取、cDNA的合成 | 第49页 |
| 3.2.3 SjPorcn基因序列的获得 | 第49-51页 |
| 3.2.4 SjPorcn基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 3.2.5 pCold-SjPorcn-318重组质粒的构建及其蛋白表达和纯化 | 第52-53页 |
| 3.2.6 SjPorcn干扰siRNA的筛选 | 第53-54页 |
| 3.2.7 SjPorcn基因下调对Wnt信号通路下游基因mRNA水平调节 | 第54页 |
| 3.3 结果 | 第54-60页 |
| 3.3.1 SjPorcn基因序列的获得 | 第54-55页 |
| 3.3.2 SjPorcn基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第55-57页 |
| 3.3.3 pCold-SjPorcn-318重组质粒的构建及其蛋白表达 | 第57-58页 |
| 3.3.4 SjPorcn干扰siRNA的筛选 | 第58-59页 |
| 3.3.5 SjPorcn基因下调对Wnt信号通路下游基因mRNA水平调节 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 日本血吸虫WLS基因的克隆、表达及RNA干扰分析 | 第62-73页 |
| 4.1 材料 | 第62页 |
| 4.1.1 实验动物及虫株 | 第62页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 4.2 方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 不同期别及性别日本血吸虫的收集 | 第62页 |
| 4.2.2 总RNA的提取、cDNA的合成及总蛋白的抽提 | 第62页 |
| 4.2.3 Sj Wls基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第62页 |
| 4.2.4 pET- Sj Wls-44重组质粒的构建及其蛋白表达和纯化 | 第62-64页 |
| 4.2.5 Sj Wls蛋白的免疫原性、多克隆抗体制备及特异性分析 | 第64页 |
| 4.2.6 Sj Wls蛋白在虫体的组织定位 | 第64页 |
| 4.2.7 Sj Wls干扰siRNA的筛选 | 第64页 |
| 4.2.8 Sj Wls基因下调对Wnt信号通路成员mRNA水平调节 | 第64-65页 |
| 4.3 结果 | 第65-71页 |
| 4.3.1 Sj Wls基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第65-67页 |
| 4.3.2 pET- Sj Wls-44重组质粒的构建及其蛋白表达和纯化 | 第67页 |
| 4.3.3 Sj Wls蛋白的免疫原性及多克隆抗体特异性分析 | 第67-68页 |
| 4.3.4 Sj Wls蛋白在虫体中的组织定位 | 第68-69页 |
| 4.3.5 Sj Wls干扰siRNA的筛选 | 第69-71页 |
| 4.3.6 Sj Wls基因下调对Wnt信号通路成员mRNA水平调节 | 第71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 日本血吸虫WNT1基因的鉴定及在不同发育阶段表达水平分析 | 第73-83页 |
| 5.1 材料 | 第73页 |
| 5.1.1 实验动物及虫株 | 第73页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 5.2 方法 | 第73-75页 |
| 5.2.1 不同期别及性别日本血吸虫的收集 | 第73页 |
| 5.2.2 总RNA的提取、cDNA的合成及总蛋白的抽提 | 第73页 |
| 5.2.3 Sj Wnt1基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第73页 |
| 5.2.4 pET- Sj Wnt1-216重组质粒的构建及其蛋白表达和纯化 | 第73-74页 |
| 5.2.5 Sj Wnt1蛋白的多克隆抗体制备、特异性分析 | 第74页 |
| 5.2.6 不同发育阶段及不同性别虫体中Sj Wnt1 mRNA水平比较 | 第74页 |
| 5.2.7 不同发育阶段及不同性别虫体中Sj Wnt1蛋白水平比较 | 第74-75页 |
| 5.2.8 发育正常和发育不良的日本血吸虫中SjWnt1 mRNA水平比较 | 第75页 |
| 5.2.9 有效Sj Wnt1 siRNA的筛选 | 第75页 |
| 5.2.10 Sj Wnt1基因下调对Wnt信号通路下游基因mRNA水平调节 | 第75页 |
| 5.3 结果 | 第75-81页 |
| 5.3.1 Sj Wnt1基因编码蛋白的序列特征 | 第75-77页 |
| 5.3.2 pET-Sj Wnt1-216重组质粒的鉴定及纯化重组蛋白 | 第77-78页 |
| 5.3.3 Sj Wnt1-813多克隆抗体的特异性鉴定 | 第78页 |
| 5.3.4 不同发育阶段及不同性别虫体中Sj Wnt1 mRNA水平比较 | 第78页 |
| 5.3.5 不同发育阶段及不同性别虫体中Sj Wnt1蛋白水平比较 | 第78-79页 |
| 5.3.6 发育正常和发育不良的日本血吸虫中SjWnt1 mRNA表达水平分析 | 第79-80页 |
| 5.3.7 Sj Wnt1干扰siRNA的筛选 | 第80页 |
| 5.3.8 Sj Wnt1基因下调对Wnt信号通路下游基因mRNA水平调节 | 第80-81页 |
| 5.4 讨论 | 第81-83页 |
| 第六章 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 作者简历 | 第91页 |
