| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 流行概况及危害 | 第13-14页 |
| 1.2 病原及其理化性质 | 第14-15页 |
| 1.3 病毒基因组结构及其结构蛋白 | 第15-17页 |
| 1.4 VSV疫苗研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.1 灭活苗 | 第17页 |
| 1.4.2 弱毒苗 | 第17-18页 |
| 1.4.3 亚单位疫苗 | 第18页 |
| 1.4.4 基因工程疫苗 | 第18页 |
| 1.5 重组腺病毒疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5.1 腺病毒 | 第18-19页 |
| 1.5.2 复制缺陷型腺病毒载体 | 第19页 |
| 1.5.3 腺病毒载体在疫苗研究中的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 表达水泡性.炎病毒G蛋白重组腺病毒的构建与鉴定 | 第21-45页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌株、细胞及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.3 主要的仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.4 实验所用主要试剂及配制方法 | 第23-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.2 Vero细胞的培养 | 第26-27页 |
| 2.2.3 VSV-NJ的增殖 | 第27页 |
| 2.2.4 VSV-NJ病毒RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.5 VSV-NJ-G基因的RT-PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.6 VSV-IN-G基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.7 VSV-IN-G-NJ-G基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.8 E.coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.9 将目的基因克隆至T载体 | 第30-31页 |
| 2.2.10重组腺病毒穿梭质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.11大量提取重组穿梭质粒及骨架载体质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.12重组腺病毒的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.13重组腺病毒的鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.14重组腺病毒的扩增及遗传稳定性分析 | 第36页 |
| 2.2.15重组腺病毒G蛋白表达的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.3.1 VSV-NJ-G基因的扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.2 VSV-IN-G基因的扩增 | 第38页 |
| 2.3.3 VSV-IN-G-NJ-G基因的扩增 | 第38-39页 |
| 2.3.4 重组腺病毒穿梭质粒的构建 | 第39页 |
| 2.3.5 重组腺病毒的构建 | 第39-41页 |
| 2.3.6 重组腺病毒的扩增与遗传稳定性分析 | 第41页 |
| 2.3.7 Western blot检测G蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 2.3.8 间接免疫荧光检测 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 表达VSV G蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性分析 | 第45-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.1 细胞及病毒 | 第45页 |
| 3.1.2 试剂及实验动物 | 第45页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.2.1 实验动物的选择和分组 | 第45-46页 |
| 3.2.2 免疫原的制备 | 第46页 |
| 3.2.3 动物免疫程序 | 第46页 |
| 3.2.4 免疫后样品采集 | 第46-47页 |
| 3.2.5 抗VSV特异性抗体的检测 | 第47页 |
| 3.2.6 免疫小鼠中和抗体的检测 | 第47-48页 |
| 3.2.7 免疫小鼠T淋巴细胞增殖试验 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-52页 |
| 3.3.1 抗VSV特异性抗体的检测 | 第49页 |
| 3.3.2 免疫小鼠中和抗体的检测 | 第49-51页 |
| 3.3.3 免疫小鼠淋巴细胞增殖试验 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
