| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 兔出血症及兔出血症病毒概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 兔出血症 | 第13页 |
| 1.1.2 兔出血症病毒 | 第13-14页 |
| 1.2 兔出血症病毒的蛋白及其功能 | 第14-17页 |
| 1.2.1 结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.2 非结构蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.3 RHDV的细胞受体 | 第16-17页 |
| 1.3 血红蛋白概述 | 第17-18页 |
| 1.4 蛋白相互作用研究技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 双杂交系统 | 第18-19页 |
| 1.4.2 免疫共沉淀 | 第19页 |
| 1.4.3 pull down实验 | 第19页 |
| 1.4.4 蛋白质共定位 | 第19-20页 |
| 1.4.5 其他蛋白质互作技术 | 第20页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 利用CRISPR/CAS9基因编辑技术构建缺失HB基因的RK-13 细胞系 | 第21-27页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 sgRNA设计和寡核苷酸链合成 | 第23页 |
| 2.2.2 pX459-HB重组质粒的构建 | 第23页 |
| 2.2.3 细胞转染及阳性细胞筛选 | 第23页 |
| 2.2.4 HB基因敲除细胞株鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-26页 |
| 2.3.1 重组质粒构建鉴定 | 第24页 |
| 2.3.2 HB基因敲除株的鉴定 | 第24-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 RHDV荧光定量PCR（qPCR）检测方法的建立 | 第27-34页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 质粒与毒株 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 PCR引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 3.2.2 模板制备 | 第29页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR最佳条件选择 | 第29页 |
| 3.2.4 标准曲线建立 | 第29页 |
| 3.2.5 熔解曲线建立 | 第29页 |
| 3.2.6 特异性实验 | 第29-30页 |
| 3.2.7 敏感性实验 | 第30页 |
| 3.3 实验结果 | 第30-32页 |
| 3.3.1 目的基因片段的扩增 | 第30-32页 |
| 3.3.2 荧光定量PCR反应条件优化 | 第32页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第32页 |
| 3.3.4 熔解曲线分析 | 第32页 |
| 3.3.5 特异性分析 | 第32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 血红蛋白 Β 亚基对RHDV复制的影响 | 第34-49页 |
| 4.1 材料 | 第34-36页 |
| 4.1.1 病毒、细胞系、抗体与载体 | 第34-35页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 4.1.4 主要缓冲液的配制 | 第35-36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 4.2.1 质粒构建 | 第37-39页 |
| 4.2.2 CO-IP钓取宿主蛋白 | 第39页 |
| 4.2.3 GST-HB的原核表达 | 第39-40页 |
| 4.2.4 免疫共沉淀（Co-IP）实验 | 第40页 |
| 4.2.5 GST-Pull Down实验 | 第40-41页 |
| 4.2.6 蛋白共定位 | 第41-42页 |
| 4.2.7 qRT-PCR分析 | 第42页 |
| 4.3 实验结果 | 第42-48页 |
| 4.3.1 CO-IP钓取宿主蛋白结果 | 第42-44页 |
| 4.3.2 GST-HB的原核表达 | 第44-46页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀（Co-IP）实验结果 | 第46页 |
| 4.3.4 GST pull down验证VP60与HB的相互作用 | 第46页 |
| 4.3.5 激光共聚焦蛋白共定位 | 第46-47页 |
| 4.3.6 HB蛋白对RHDV复制的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |
