| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 水稻瘤矮病毒的研究概况 | 第10-13页 |
| 1.1.1 水稻瘤矮病 | 第10页 |
| 1.1.2 水稻瘤矮病毒粒体结构和特点 | 第10-11页 |
| 1.1.3 RGDV基因组及蛋白功能的研究 | 第11-13页 |
| 1.1.4 RGDV的传播介体 | 第13页 |
| 1.2 植物呼肠孤病毒在介体内复制和装配的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 昆虫细胞培养及其应用 | 第14-15页 |
| 1.3.1 昆虫细胞培养 | 第14-15页 |
| 1.3.2 昆虫细胞培养的应用 | 第15页 |
| 1.4 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第15-17页 |
| 1.4.1 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的原理 | 第16页 |
| 1.4.2 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 RNAi原理及其应用 | 第17-19页 |
| 1.5.1 RNAi原理 | 第17-18页 |
| 1.5.2 RNAi的应用 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2. RGDV非结构蛋白Pns7、Pns9、Pns12的功能研究 | 第20-40页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.1 RGDV毒株和电光叶蝉 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株、培养细胞和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 实验试剂、药品和实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 Bacmid DNA重组穿梭质粒表达载体的构建 | 第20-29页 |
| 2.2.1.1 水稻病叶总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.1.2 RGDVIns7、Pns9和Pns12基因的扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.1.3 RGDVPns7、Pns9和Pns12目的基因DNA片段的回收 | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 RGDVPns7、Pns9和Pns12目的基因连接pMD18-T克隆载体 | 第24页 |
| 2.2.1.5 目的基因转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.1.6 质粒的提取与阳性克隆鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 质粒的双酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.2.1.8 目的基因与表达载体pFastBacl的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.1.9 重组质粒转化大肠杆菌DH10Bac | 第27页 |
| 2.2.1.10 Bacmid DNA重组穿梭质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.1.11 Bacmid DNA重组穿梭质粒的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.2 Bacmid DNA重组穿梭质粒转染Sf9细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 Sf9培养细胞的准备 | 第29页 |
| 2.2.2.2 Sf9培养细胞侵染上清液的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 免疫荧光标记法检测Pns7、Pns9和Pns12的表达 | 第30页 |
| 2.2.3 双链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.4 免疫荧光标记检测dsPns7、dsPns9、dsPns12对RGDV侵染的影响 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 RGDV Pns7、Pns9和Pns12基因片段的扩增 | 第32页 |
| 2.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 RDGV Pns7、Pns9和Pns12在Sf9细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 2.3.4 RGDV Pns7、Pns9和Pns12片段dsRNAs的合成 | 第35页 |
| 2.3.5 dsRNAs对RGDV在电光叶蝉培养细胞内复制的影响 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-40页 |
| 3. RGDV外壳蛋白P8的功能研究 | 第40-47页 |
| 3.1 材料 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1 目的基因片段dsRNAs的合成 | 第40页 |
| 3.2.2 电光叶蝉培养细胞VCMs的培养 | 第40-41页 |
| 3.2.3 病毒侵染液的制备 | 第41页 |
| 3.2.4 免疫荧光标记检测dsP8对RGDV侵染的影响 | 第41页 |
| 3.2.5 病毒基因组dsRNAs的提取与检测 | 第41-42页 |
| 3.2.6 Western blot检测dsRNA处理细胞对病毒编码蛋白的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-45页 |
| 3.3.1 P8和GFP片段dsRNAs的合成 | 第43页 |
| 3.3.2 dsRNAs对RGDV在介体培养细胞内装配的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 dsP8对病毒基因组复制的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4 dsP8对RGDV蛋白表达的影响 | 第45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 4. 小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 附录1 所用主要试剂及缓冲液的配置 | 第56-61页 |
| 附录2 载体图谱 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
