| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文章综述 | 第11-19页 |
| 1.1 链霉菌概述 | 第11-12页 |
| 1.2 影响链霉菌基因改造的主要原因 | 第12页 |
| 1.3 遗传转化系统 | 第12-13页 |
| 1.3.1 原生质体的转化 | 第12-13页 |
| 1.3.2 电转化 | 第13页 |
| 1.3.3 大肠杆菌-链霉菌的接合转移 | 第13页 |
| 1.4 基因敲除 | 第13-15页 |
| 1.4.1 基因敲除的概念 | 第13-14页 |
| 1.4.2 基因敲除的起源和原理 | 第14页 |
| 1.4.3 微生物基因敲除系统 | 第14-15页 |
| 1.5 全局性调控基因bldA及MarR转录因子概述 | 第15-18页 |
| 1.5.1 转录因子的概念 | 第15-16页 |
| 1.5.2 全局性调控因子bldA基因及转录调控因子MarR的生物学功能 | 第16-18页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 盐碱地放线菌的分离和筛选 | 第19-26页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 分离培养基 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 样品的预处理 | 第19页 |
| 2.2.2 盐碱地放线菌的分离方法 | 第19-20页 |
| 2.2.3 放线菌菌株生物活性测定 | 第20页 |
| 2.2.4 筛选菌株 16S rDNA序列测定 | 第20-21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-25页 |
| 2.3.1 盐碱地土壤样品中链霉菌的分离纯化 | 第21-22页 |
| 2.3.2 链霉菌生物活性筛选结果 | 第22-24页 |
| 2.3.3 分离菌株 16S rDNA序列测定 | 第24-25页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 菌株S-5、S-27 和S-28 的分类鉴定 | 第26-31页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 菌株 | 第26页 |
| 3.1.2 培养基 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26页 |
| 3.2.1 形态观察和培养特征观察 | 第26页 |
| 3.2.2 生理生化特征 | 第26页 |
| 3.2.3 16S rDNA序列分析与系统进化树的构建 | 第26页 |
| 3.3 结果与分析 | 第26-30页 |
| 3.3.1 形态特征 | 第26-27页 |
| 3.3.2 培养特征 | 第27页 |
| 3.3.3 生理生化特征 | 第27-29页 |
| 3.3.4 系统进化树的构建 | 第29-30页 |
| 3.4 结论 | 第30-31页 |
| 第四章3株链霉菌遗传转化系统的构建 | 第31-39页 |
| 4.1 实验材料 | 第31页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第31页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 4.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 4.2.1 大肠杆菌——放线菌属间接合转移系统的建立 | 第31-33页 |
| 4.2.2 接合转移接合子检测 | 第33页 |
| 4.2.3 接合子的保藏 | 第33页 |
| 4.3 结果与分析 | 第33-38页 |
| 4.3.1 转化感受态细胞的质粒提取与检测 | 第33-34页 |
| 4.3.2 接合转移培养基的选择 | 第34页 |
| 4.3.3 抗生素的使用浓度 | 第34页 |
| 4.3.4 接合转移 | 第34-35页 |
| 4.3.5 接合子传代与抗性筛选 | 第35-36页 |
| 4.3.6 接合转化子PCR验证 | 第36-38页 |
| 4.3.7 菌株S-28 接合转移系统的优化 | 第38页 |
| 4.4 结论 | 第38-39页 |
| 第五章 bldA与MarR转录因子的初步研究 | 第39-62页 |
| 5.1 材料 | 第39-40页 |
| 5.1.1 菌株、引物与质粒 | 第39页 |
| 5.1.2 培养基 | 第39页 |
| 5.1.3 缓冲液 | 第39-40页 |
| 5.1.4 蛋白胶相关试剂 | 第40页 |
| 5.1.5 蛋白分析相关试剂 | 第40页 |
| 5.1.6 酶制剂 | 第40页 |
| 5.2 方法 | 第40-45页 |
| 5.2.1 S-28 中MarR转录基因和bldA基因的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 5.2.2 敲除载体的构建 | 第41-43页 |
| 5.2.3 重组载体的构建 | 第43-44页 |
| 5.2.4 蛋白质的诱导表达 | 第44页 |
| 5.2.5 诱导蛋白的镍柱纯化 | 第44页 |
| 5.2.6 蛋白凝胶电泳检测 | 第44-45页 |
| 5.2.7 基因敲除 | 第45页 |
| 5.3 结果与分析 | 第45-60页 |
| 5.3.1 S-28 链霉菌基因组生物信息学分析 | 第45页 |
| 5.3.2 S-28 链霉菌中bldA基因的敲除 | 第45-52页 |
| 5.3.3 S-28 基因组中MarR转录因子基因敲除 | 第52-54页 |
| 5.3.4 S-28 基因组中MarR转录因子的异源表达 | 第54-60页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
