| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第10-26页 |
| 1. 小鼠生殖细胞的胚胎发育 | 第10-13页 |
| 1.1 生殖细胞的起源 | 第10-11页 |
| 1.2 原始生殖细胞PGC形成决定机制 | 第11-12页 |
| 1.3 原始生殖细胞的增殖和迁移 | 第12-13页 |
| 2. 精子发生 | 第13-19页 |
| 2.1 精子发生过程概况 | 第13-14页 |
| 2.2 精原细胞的增殖和干细胞更新 | 第14-15页 |
| 2.3 精母细胞的形成与减数分裂 | 第15-17页 |
| 2.4 精子形成 | 第17-18页 |
| 2.5 精子的成熟 | 第18-19页 |
| 3. Asz1基因及功能研究 | 第19-20页 |
| 3.1 Asz1基因及蛋白结构介绍 | 第19-20页 |
| 3.2 Asz1基因功能研究 | 第20页 |
| 4. 线粒体及线粒体融合蛋白Mfn1/2 | 第20-23页 |
| 4.1 线粒体结构和功能 | 第20-22页 |
| 4.2 线粒体形态变化 | 第22页 |
| 4.3 线粒体融合蛋白 | 第22-23页 |
| 5. 生殖质颗粒Nuage | 第23-24页 |
| 6 CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-50页 |
| 1. 实验材料 | 第26-32页 |
| 1.1 实验所用主要试剂 | 第26-29页 |
| 1.2 实验材料 | 第29页 |
| 1.3 抗体 | 第29-30页 |
| 1.4 实验仪器 | 第30-32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-50页 |
| 2.1 建立CRISPR-Cas9敲除小鼠 | 第32-37页 |
| 2.2 小鼠基因组提取 | 第37-38页 |
| 2.3 敲除小鼠基因型鉴定 | 第38-40页 |
| 2.4 小鼠睾丸组织石蜡切片制备 | 第40-41页 |
| 2.5 小鼠睾丸组织冰冻切片制备 | 第41页 |
| 2.6 苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin Staining) | 第41-42页 |
| 2.7 石蜡切片组织免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| 2.8 冰冻切片组织免疫荧光染色 | 第43页 |
| 2.9 蛋白质印迹法(Western Blot) | 第43-46页 |
| 2.10 Aszl融合蛋白稳定性检测 | 第46-47页 |
| 2.11 Stra8-Cre介导Mfn1/2条件性敲除小鼠模型建立 | 第47页 |
| 2.12 Mfn1/2条件性敲除小鼠基因型鉴定 | 第47-48页 |
| 2.13 精子活力检测 | 第48页 |
| 2.14 酪氨酸磷酸化检测 | 第48-50页 |
| 第三章 实验结果与实验分析 | 第50-65页 |
| 1. Asz1蛋白具有线粒体定位信号 | 第50-51页 |
| 2. Asz1线粒体定位信号肽功能对精子发育的影响 | 第51-62页 |
| 2.1 利用CRISPR/Cas9系统获得Aszl线粒体定位信号缺失小鼠 | 第51-54页 |
| 2.2 Asz1~(△MLS/△MLS)小鼠睾丸组织学和形态学的变化 | 第54-55页 |
| 2.3 Asz1~(△MLS/△MLS)小鼠生殖质颗粒组分蛋白的变化 | 第55-58页 |
| 2.4 Asz1蛋白表达检测 | 第58页 |
| 2.5 Mfn1/2条件性敲除对小鼠精子活力的影响 | 第58-61页 |
| 2.6 Mfn1/2条件性敲除小鼠精子酪氨酸磷酸化检测 | 第61页 |
| 2.7 Mfn1/2条件性敲除小鼠生育能力的影响 | 第61-62页 |
| 3. 总结与讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
