| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 第1章 综述 | 第13-23页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·花生过敏 | 第13-16页 |
| ·花生过敏的危害 | 第13-14页 |
| ·花生主要过敏原及其研究进展 | 第14-16页 |
| ·Ara h 1 | 第14-15页 |
| ·Ara h 2 | 第15页 |
| ·Ara h 3 | 第15-16页 |
| ·食物过敏的防治 | 第16-19页 |
| ·经典特异性免疫治疗 | 第16页 |
| ·肽免疫疗法 | 第16-17页 |
| ·突变过敏原蛋白免疫疗法 | 第17-18页 |
| ·非特异性的免疫治疗 | 第18页 |
| ·DNA免疫疗法 | 第18-19页 |
| ·自然疗法 | 第19页 |
| ·花生过敏的预防及其治疗研究进展 | 第19-20页 |
| ·壳聚糖纳米粒疫苗 | 第20-23页 |
| ·纳米物质 | 第20页 |
| ·壳聚糖 | 第20-21页 |
| ·制备壳聚糖纳米粒 | 第21-22页 |
| ·壳聚糖纳米粒疫苗 | 第22-23页 |
| 第2章 重组花生Ara h 2蛋白的制备 | 第23-43页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株、质粒 | 第23页 |
| ·工具酶、分子量Marker及主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器与设备 | 第24页 |
| ·常规培养基及溶液配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法与步骤 | 第26-35页 |
| ·Ara h 2重组质粒提取 | 第26页 |
| ·用EcoRI和HindⅢ双酶切Ara h 2重组质粒及pET-32a载体 | 第26-27页 |
| ·Ara h 2重组质粒双酶切 | 第26-27页 |
| ·pET-32a载体双酶切 | 第27页 |
| ·回收双酶切后的DNA片段 | 第27-28页 |
| ·构建pET-32a-Ara h 2重组质粒 | 第28页 |
| ·大肠杆菌E.coli Top10感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第29页 |
| ·pET-32a-Ara h 2重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·pET-32a-Ara h 2重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·DNA测序 | 第30页 |
| ·目的基因的原核表达及SDS-PAGE检测 | 第30-33页 |
| ·大肠杆菌E.coli origami感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·pET-32a-Ara h 2质粒转化感受态 | 第31页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| ·分离纯化重组蛋白 | 第33-35页 |
| ·超声破碎菌体 | 第33-34页 |
| ·亲和纯化重组蛋白 | 第34页 |
| ·透析重组蛋白 | 第34-35页 |
| ·纯化后重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第35页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-41页 |
| ·pET-32a-Ara h 2重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·pET-32a-Ara h 2重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第36-37页 |
| ·质粒提取与限制性内切酶酶切鉴定 | 第37页 |
| ·pET-32a-Ara h 2重组质粒转化E.coli origami感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白诱导表达的SDS-PAGE检测分析 | 第38-39页 |
| ·细胞破碎与亲和纯化的SDS-PAGE检测 | 第39-40页 |
| ·重组Ara h 2的浓度 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第3章 重组Ara h 2壳聚糖纳米粒的制备 | 第43-51页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料与试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·实验方法与步骤 | 第44-46页 |
| ·离子交联法制备重组Ara h 2壳聚糖纳米粒(CS-R-Ara h 2) | 第44页 |
| ·CS-R-Ara h 2包封率和载药量测定 | 第44页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒SDS-PAGE电泳检测 | 第44-45页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒外貌形态的SEM电镜检测 | 第45页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米的Western-Blotting鉴定 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒的包封率(AE)和载药量(LC) | 第46-47页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第47页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒的SEM电镜检测结果 | 第47-48页 |
| ·CS-R-Ara h 2纳米粒的Western-Blotting鉴定 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第4章 重组过敏原Ara h 2壳聚糖纳米粒抗过敏反应的实验动物学研究 | 第51-67页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·实验方法与步骤 | 第52-57页 |
| ·花生粗蛋白的提取 | 第52页 |
| ·CPE的SDS-PAGE电泳分析 | 第52-53页 |
| ·CPE溶液的蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| ·免疫小鼠 | 第53-54页 |
| ·过敏反应各项指标的检测 | 第54-57页 |
| ·血管通透性的检测 | 第54页 |
| ·小鼠血清特异性IgE的Western-Blotting分析 | 第54-55页 |
| ·血浆中组胺的检测 | 第55页 |
| ·血清中特异性IgE(sIgE)和特异性IgG2a(sIgG2a)的检测 | 第55-56页 |
| ·细胞因子的检测 | 第56-57页 |
| ·数据分析 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-64页 |
| ·CPE的SDS-PAGE电泳分析 | 第57页 |
| ·CPE的浓度测定 | 第57-58页 |
| ·血管通透性的检测结果 | 第58页 |
| ·小鼠血清特异性IgE的Western-Blotting分析 | 第58-59页 |
| ·血浆中组胺含量(ELISA法) | 第59-60页 |
| ·血清中特异性IgE(sIgE)和特异性IgG2a(sIgG2a)的检测 | 第60-61页 |
| ·ELISA法检测Th1和Th2细胞因子水平 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67页 |
| ·研究展望 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第78页 |
