| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词与中英对照 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 柑橘脉突病毒（Citrus vein enation virus, CVEV）研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第14页 |
| 1.1.2 CVEV的理化特性和传播途径 | 第14-15页 |
| 1.1.3 CVEV的分类地位及分子生物学特性 | 第15页 |
| 1.1.4 CVEV检测方法 | 第15-16页 |
| 1.2 果树病毒侵染性克隆的构建及其应用研究进展 | 第16-22页 |
| 1.2.1 果树病毒侵染性克隆现状 | 第16-18页 |
| 1.2.2 果树病毒侵染性克隆的构建 | 第18-19页 |
| 1.2.3 果树病毒侵染性克隆的应用 | 第19-22页 |
| 1.2.4 展望 | 第22页 |
| 1.3 植物病毒基因沉默抑制子研究进展 | 第22-28页 |
| 1.3.1 基因沉默 | 第22-23页 |
| 1.3.2 基因沉默抑制子 | 第23-25页 |
| 1.3.3 展望 | 第25-28页 |
| 第二章 引言 | 第28-32页 |
| 2.1 研究背景 | 第28-29页 |
| 2.2 技术路线 | 第29页 |
| 2.3 主要研究内容 | 第29-32页 |
| 2.3.1 CVEV实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用 | 第29页 |
| 2.3.2 CVEV基因组全长cDNA克隆构建 | 第29页 |
| 2.3.3 CVEV基因组全长cDNA克隆侵染性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.4 CVEV基因沉默抑制子初步鉴定 | 第30-32页 |
| 第三章 柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用 | 第32-46页 |
| 3.1 试验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 供试毒源 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 RNA提取 | 第33页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第33-34页 |
| 3.2.3 RT-PCR扩增与克隆鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.4 制备质粒标准品 | 第36页 |
| 3.2.5 实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立 | 第36-37页 |
| 3.2.6 实时荧光定量RT-PCR检测体系的评价 | 第37页 |
| 3.2.7 实时荧光定量RT-PCR检测体系的应用 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 RT-PCR扩增与克隆鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 实时荧光定量RT-PCR条件的优化及体系的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.3 实时荧光定量RT-PCR反应体系的测试 | 第40-42页 |
| 3.3.4 应用 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 CVEV全长cDNA克隆及序列分析 | 第46-62页 |
| 4.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 供试毒源 | 第46页 |
| 4.1.2 载体 | 第46页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第46-47页 |
| 4.1.5 菌株 | 第47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 柑橘叶片总RNA提取（Trizol试剂） | 第47页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第47-48页 |
| 4.2.3 RT-PCR扩增与克隆鉴定 | 第48-52页 |
| 4.2.4 序列分析 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-60页 |
| 4.3.1 柑橘叶片总RNA提取 | 第52-53页 |
| 4.3.2 RT-PCR扩增、克隆与测序 | 第53-55页 |
| 4.3.3 CVEV基因组全长cDNA的PCR鉴定及序列分析 | 第55-58页 |
| 4.3.4 CVEV序列二级结构 | 第58-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 4.4.1 CVEV全长cDNA扩增及克隆 | 第60页 |
| 4.4.2 CVEV全长cDNA序列分析 | 第60-62页 |
| 第五章 CVEV全长cDNA克隆的侵染性分析 | 第62-74页 |
| 5.1 试验材料 | 第62页 |
| 5.1.1 CVEV全长cDNA阳性克隆 | 第62页 |
| 5.1.2 植物材料 | 第62页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第62页 |
| 5.1.5 接种缓冲液成分 | 第62页 |
| 5.2 试验方法 | 第62-67页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第62-63页 |
| 5.2.2 农杆菌转化 | 第63页 |
| 5.2.3 接种农杆菌液准备 | 第63-64页 |
| 5.2.4 接种 | 第64页 |
| 5.2.5 影响CVEV全长cDNA克隆侵染性因素分析 | 第64-67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-72页 |
| 5.3.1 CVEV全长cDNA侵染性分析 | 第67-68页 |
| 5.3.2 影响CVEV全长cDNA克隆侵染性的分析 | 第68-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第六章 CVEV基因沉默抑制子的初步鉴定 | 第74-86页 |
| 6.1 试验材料 | 第74-75页 |
| 6.1.1 供试毒源 | 第74页 |
| 6.1.2 表达载体及草本植物 | 第74页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第74-75页 |
| 6.1.4 主要仪器 | 第75页 |
| 6.1.5 主要缓冲液成分 | 第75页 |
| 6.2 试验方法 | 第75-80页 |
| 6.2.1 柑橘叶片总RNA提取 | 第75页 |
| 6.2.2 引物设计 | 第75-76页 |
| 6.2.3 RT-PCR扩增与克隆鉴定 | 第76-78页 |
| 6.2.4 沉默抑制子鉴定 | 第78-79页 |
| 6.2.5 沉默抑制子效应分析 | 第79-80页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第80-84页 |
| 6.3.1 CVEV 5 个ORF的RT-PCR扩增 | 第80-81页 |
| 6.3.2 CVEV ORF重组表达载体构建 | 第81-82页 |
| 6.3.3 沉默表型观察 | 第82-84页 |
| 6.3.4 接种本生烟植株的实时荧光定量RT-PCR检测 | 第84页 |
| 6.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第七章 主要结论及展望 | 第86-88页 |
| 7.1 主要结论 | 第86-87页 |
| 7.1.1 CVEV实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用 | 第86页 |
| 7.1.2 CVEV全长cDNA克隆构建及序列分析 | 第86页 |
| 7.1.3 CVEV全长cDNA克隆的侵染性分析 | 第86页 |
| 7.1.4 CVEV编码基因沉默抑制子的鉴定 | 第86-87页 |
| 7.2 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及参加科研项目 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
