| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 绪论 | 第14-44页 |
| 1.1 蜘蛛丝简介 | 第14-32页 |
| 1.1.1 前言 | 第14页 |
| 1.1.2 蜘蛛丝种类、性能和分子结构 | 第14-22页 |
| 1.1.3 蜘蛛丝体内纺丝机制 | 第22-25页 |
| 1.1.4 蛛丝蛋白的制备与蛛丝的仿生 | 第25-27页 |
| 1.1.5 蛛丝的功能化修饰 | 第27-31页 |
| 1.1.6 蛛丝的力学性能的优化 | 第31-32页 |
| 1.2 蛋白质内含子简介 | 第32-34页 |
| 1.2.1 前言 | 第32页 |
| 1.2.2 蛋白质内含子的分类 | 第32页 |
| 1.2.3 蛋白质内含子的应用 | 第32页 |
| 1.2.4 蛋白质内含子在实验室条件下的定向筛选 | 第32-34页 |
| 1.3 本课题的研究内容和意义 | 第34-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| 2 实验材料与方法 | 第44-54页 |
| 2.1 克隆的构建与转化 | 第44-45页 |
| 2.1.1 材料、试剂及器具 | 第44页 |
| 2.1.2 操作步骤 | 第44-45页 |
| 2.2 克隆的鉴定以及质粒DNA的抽提 | 第45-47页 |
| 2.2.1 材料、试剂及器具 | 第45页 |
| 2.2.2 操作步骤 | 第45-47页 |
| 2.3 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第47-49页 |
| 2.3.1 重组蛋白诱导表达 | 第47-48页 |
| 2.3.2 含有His-tag的蛋白纯化 | 第48页 |
| 2.3.3 蛋白质复性 | 第48-49页 |
| 2.4 蛋白质的柱上剪接 | 第49页 |
| 2.5 蛋白质的柱上酶切 | 第49页 |
| 2.6 紫外分光光度计法测量蛋白质浓度 | 第49-50页 |
| 2.7 蛋白质浓缩 | 第50页 |
| 2.8 蛋白质样品的定性 | 第50-52页 |
| 2.8.1 材料、试剂及器具 | 第50页 |
| 2.8.2 操作步骤 | 第50-52页 |
| 2.9 生物学检测技术 | 第52-54页 |
| 2.9.1 SEM（Scanning Electron Microscopy, 扫描电子显微镜） | 第52页 |
| 2.9.2 扫描探针显微镜 | 第52-53页 |
| 2.9.3 拉曼光谱分析（Raman Spectroscopy） | 第53页 |
| 2.9.4 圆二色谱（Circular Dichroism, CD） | 第53-54页 |
| 3 携带外源蛋白质的重组包裹丝的制备 | 第54-78页 |
| 3.1 研究背景 | 第54-56页 |
| 3.2 材料与实验方法 | 第56-61页 |
| 3.2.1 表达质粒的构建 | 第56-58页 |
| 3.2.2 蛋白质的表达与纯化 | 第58-60页 |
| 3.2.3 丝纤维的制备 | 第60页 |
| 3.2.4 丝纤维中外源蛋白的稳定性检测 | 第60-61页 |
| 3.2.5 单丝的性能检测 | 第61页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第61-71页 |
| 3.3.1 蛋白质表达和标记 | 第61-63页 |
| 3.3.2 杂合丝的制备 | 第63-65页 |
| 3.3.3 杂合丝携带外源蛋白的能力 | 第65-67页 |
| 3.3.4 共纺入丝纤维中的外源蛋白质的量 | 第67-69页 |
| 3.3.5 杂合丝的定性 | 第69-71页 |
| 3.4 总结 | 第71-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 4 蛋白质内含子介导蛛丝功能化平台的建立 | 第78-98页 |
| 4.1 研究背景 | 第78-79页 |
| 4.2 材料与实验方法 | 第79-85页 |
| 4.2.1 表达质粒的构建 | 第79-83页 |
| 4.2.2 蛋白质的表达与纯化 | 第83-84页 |
| 4.2.3 重组蛛丝的制备及其定量 | 第84页 |
| 4.2.4 杂合蛛丝上修饰蛋白的活性检测 | 第84-85页 |
| 4.2.5 重组蛛丝性能测试 | 第85页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第85-94页 |
| 4.3.1 功能化蛛丝蛋白的制备 | 第86-89页 |
| 4.3.2 功能化蛛丝的形成速率和产量的检测 | 第89页 |
| 4.3.3 功能蛋白的生物活性的检测 | 第89-92页 |
| 4.3.4 功能化蛛丝的性能检测 | 第92-94页 |
| 4.4 总结 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 5 蛋白质内含子介导的杂合丝蛋白的制备及其杂合丝性能的研究 | 第98-120页 |
| 5.1 研究背景 | 第98-99页 |
| 5.2 材料与方法 | 第99-103页 |
| 5.2.1 克隆的构建和蛋白质的表达 | 第99-100页 |
| 5.2.2 蛋白质的表达与纯化 | 第100-101页 |
| 5.2.3 蛋白质二级结构的检测 | 第101-102页 |
| 5.2.4 丝纤维的制备过程 | 第102页 |
| 5.2.5 重组丝纤维的性能检测 | 第102-103页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第103-116页 |
| 5.3.1 蛋白质的表达纯化，蛋白质的二级结构以及热稳定性 | 第103-108页 |
| 5.3.2 重组丝的形成 | 第108-111页 |
| 5.3.3 重组丝纤维的性能检测 | 第111-116页 |
| 5.4 总结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-120页 |
| 6 DNA展示技术介导的断裂蛋白质内含子体外定向进化平台的建立 | 第120-136页 |
| 6.1 研究背景 | 第120-122页 |
| 6.2 材料与方法 | 第122-126页 |
| 6.2.1 断裂蛋白质内含子的体外筛选流程的设计 | 第122页 |
| 6.2.2 人工细胞的制备和稳定性检测 | 第122-124页 |
| 6.2.3 体外表达系统中基因的设计，制备与表达 | 第124页 |
| 6.2.4 N端前体蛋白(YIRN)的制备 | 第124-125页 |
| 6.2.5 DNA展示系统中，蛋白质剪接能力的检测 | 第125页 |
| 6.2.6 蛋白质剪接产物被选择能力检测 | 第125页 |
| 6.2.7 生物素标记基因的制备和基因形成DNA-蛋白质连接体能力的检测 | 第125-126页 |
| 6.2.8 富集效率的检测 | 第126页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第126-133页 |
| 6.3.1 人工细胞的制备 | 第126-127页 |
| 6.3.2 筛选基因在人工细胞中表达能力的检测 | 第127-128页 |
| 6.3.3 蛋白质内含子在该系统的剪接活性 | 第128-130页 |
| 6.3.4 剪接产物的筛选 | 第130页 |
| 6.3.5 DNA-蛋白质连接体的形成效率及其通过PCR而被扩增的能力检测 | 第130-132页 |
| 6.3.6 体外定向进化的模拟-富集效率的检测 | 第132-133页 |
| 6.4 总结 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-136页 |
| 7 总结与展望 | 第136-139页 |
| 7.1 总结 | 第136-137页 |
| 7.1.1 具有携带外源蛋白能力的杂合丝纤维的制备 | 第136页 |
| 7.1.2 蛋白质内含子介导的蛛丝的功能化 | 第136-137页 |
| 7.1.3 蛋白质内含子介导的杂合丝的制备 | 第137页 |
| 7.1.4 蛋白质内含子体外定向进化系统的建立 | 第137页 |
| 7.2 展望 | 第137-139页 |
| 博士期间发表论文和参加科研情况说明 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附录：Media and Buffer | 第141页 |
