缩略词表 | 第5-7页 |
摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
前言 | 第14-18页 |
第一部分 衣原体流行株的全基因组序列测定与分析 | 第18-34页 |
1 引言 | 第18页 |
2 材料与方法 | 第18-23页 |
2.1 材料 | 第18-20页 |
2.1.1 菌株、细胞、实验动物 | 第18-19页 |
2.1.2 主要实验材料及试剂 | 第19页 |
2.1.3 实验仪器设备 | 第19-20页 |
2.2 方法 | 第20-23页 |
2.2.1 细胞培养 | 第20-21页 |
2.2.2 Cps和Ct的感染 | 第21页 |
2.2.3 Cps和Ct的传代培养 | 第21-22页 |
2.2.4 Cps和Ct的纯化 | 第22页 |
2.2.5 CpsCG1株和CtQH111L株基因测序和序列分析 | 第22-23页 |
3 结果 | 第23-31页 |
3.1 CpsCG1株重测序结果 | 第23-24页 |
3.2 完成Ct的分离和培养及纯化 | 第24-25页 |
3.3 Ct QH111L株测序结果 | 第25-31页 |
4 讨论 | 第31-34页 |
第二部分 重要衣原体毒力基因的克隆表达 | 第34-60页 |
1 引言 | 第34页 |
2 材料与方法 | 第34-49页 |
2.1 材料 | 第34-36页 |
2.1.1 菌株、细胞、实验动物 | 第34页 |
2.1.2 主要实验材料及试剂 | 第34-35页 |
2.1.3 实验仪器设备 | 第35-36页 |
2.2 方法 | 第36-49页 |
2.2.1 构建B598_0590、incA和ompA基因的原核表达载体 | 第36-41页 |
2.2.2 融合蛋白的表达和纯化 | 第41-43页 |
2.2.3 动物免疫 | 第43页 |
2.2.4 细胞培养 | 第43-44页 |
2.2.5 Cps培养 | 第44页 |
2.2.6 融合蛋白的IFA | 第44页 |
2.2.7 CtCT135及移码突变后的原核表达载体构建 | 第44-45页 |
2.2.8 融合蛋白的表达 | 第45页 |
2.2.9 总RNA提取 | 第45页 |
2.2.10 CtCT135移码突变前后的RT-qPCR | 第45-47页 |
2.2.11 CtCT135 C端融合原核表达载体构建 | 第47页 |
2.2.12 CtCT135 C端融合蛋白表达和纯化 | 第47页 |
2.2.13 动物免疫 | 第47页 |
2.2.14 融合蛋白的鉴定——WB | 第47-48页 |
2.2.17 构建B598_0681基因的原核表达载体 | 第48-49页 |
2.2.18 融合蛋白的表达和纯化 | 第49页 |
3 结果 | 第49-58页 |
3.1 成功扩增B598_0590、incA和ompA基因 | 第49页 |
3.2 诱导表达并完成3种目的蛋白纯化 | 第49-50页 |
3.3 IFA观察蛋白在HeLa229细胞中的定位 | 第50-52页 |
3.4 成功扩增CtCT135基因 | 第52页 |
3.5 RT-qPCR | 第52-55页 |
3.6 完成目的蛋白的诱导表达 | 第55页 |
3.7 免疫印迹实验验证融合蛋白表达 | 第55-56页 |
3.8 成功扩增B598_0681基因 | 第56-57页 |
3.9 诱导表达并完成B598_0681基因表达蛋白的纯化 | 第57-58页 |
4 讨论 | 第58-60页 |
结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-65页 |
附录 | 第65-67页 |
个人简历 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |