| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶（ENGase）的概况 | 第7-11页 |
| 1.1.1 内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶的介绍 | 第7-8页 |
| 1.1.2 GH85的底物协助催化机理 | 第8-9页 |
| 1.1.3 内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.4 Endo-Om的简单介绍 | 第10-11页 |
| 1.2 立题依据及主要研究内容 | 第11-14页 |
| 1.2.1 立题依据 | 第11-12页 |
| 1.2.2 主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂、酶和耗材 | 第14-15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第15-17页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 GH85成员序列比对 | 第17-18页 |
| 2.2.2 Endo-Om三维结构预测 | 第18页 |
| 2.2.3 表达载体pET30-10H3F-EO m的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.4 基因定点突变 | 第20-21页 |
| 2.2.5 Endo-Om在不同宿主菌的诱导表达 | 第21-22页 |
| 2.2.6 考马斯亮蓝染色分析蛋白表达 | 第22页 |
| 2.2.7 Western blotting分析Endo-O m在E. coli BL21(DE3)p LysS的表达 | 第22页 |
| 2.2.8 重组Endo-Om在O/N instant LB培养基中的可溶性表达 | 第22页 |
| 2.2.9 重组Endo-Om的纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.10 透析 | 第23页 |
| 2.2.11 BCA试剂盒测蛋白浓度 | 第23-24页 |
| 2.2.12 蛋白的活性测定 | 第24页 |
| 2.2.13 高效液相色谱分析酶活 | 第24页 |
| 2.2.14 酶切变性及非变性条件下的糖蛋白 | 第24-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-38页 |
| 3.1 计算机模拟分析Endo-Om的三维结构 | 第27-29页 |
| 3.2 Endo-Om在E. coli表达和纯化 | 第29-34页 |
| 3.2.1 重组表达载体pET30-10H3F-EO m在不同宿主菌的诱导表达 | 第29-31页 |
| 3.2.2 Endo-Om在E. coli BL21(DE3)p LysS的可溶性表达及活性检测 | 第31-32页 |
| 3.2.3 Endo-Om的纯化及活性鉴定 | 第32-34页 |
| 3.3 Endo-Om和突变体的酶活研究 | 第34-38页 |
| 3.3.1 突变体菌株的纯化 | 第34页 |
| 3.3.2 Trp-295对Endo-O m活性影响 | 第34-36页 |
| 3.3.3 Trp-295突变体对N-糖蛋白的水解 | 第36-37页 |
| 3.3.4 Glu-332对Endo-O m活性影响 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的文章 | 第44页 |
