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苹果HMGR1基因克隆及在番茄中的功能分析

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第13-23页
    1.1 植物萜类物质第13-16页
        1.1.1 植物萜类化合物的功能第13-14页
        1.1.2 植物萜类化合物的代谢途径第14-15页
            1.1.2.1 甲羟戊酸(MVA)途径第14-15页
            1.1.2.2 2-甲基赤藓糖醇4磷酸(MEP)途径第15页
        1.1.3 植物萜类代谢途径中的相关酶第15-16页
            1.1.3.1 3-烃基3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的研究进展第16页
    1.2 植物启动子简述第16-22页
        1.2.1 启动子的种类第17-20页
            1.2.1.1 组成型启动子第17-18页
            1.2.1.2 组织特异型启动子第18页
            1.2.1.3 诱导型启动子第18-20页
        1.2.2 启动子的分离第20-22页
            1.2.2.1 利用基因组文库筛选启动子第21页
            1.2.2.2 利用启动子探针质粒载体筛选启动子第21页
            1.2.2.3 启动子捕获方法分离和鉴别启动子第21-22页
            1.2.2.4 通过PCR技术克隆启动子第22页
    1.3 本研究的目的意义第22-23页
2 材料与方法第23-36页
    2.1 实验材料第23-24页
        2.1.1 植物材料第23页
        2.1.2 菌株与质粒第23页
        2.1.3 酶和生化试剂第23页
        2.1.4 PCR引物第23-24页
    2.2 实验方法第24-36页
        2.2.1 总RNA的提取第24-25页
        2.2.2 cDNA第一条链的合成第25-26页
        2.2.3 实时荧光定量PCR第26页
        2.2.4 CTAB法提取青香蕉苹果叶片的基因组DNA第26-27页
        2.2.5 目的片段的回收第27页
        2.2.6 连接反应第27-28页
        2.2.7 重组载体转化大肠杆菌及克隆的筛选第28页
        2.2.8 质粒提取试剂盒提取质粒DNA第28-29页
        2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定第29页
        2.2.10 农杆菌感受态细胞的制备第29-30页
        2.2.11 冻融法转化农杆菌第30页
        2.2.12 农杆菌介导转化番茄第30-32页
        2.2.13 转基因番茄的PCR检测第32页
        2.2.14 转基因番茄的组织表达分析第32页
            2.2.14.1 试剂盒法提取总RNA第32页
            2.2.14.2 RNA反转录第32页
            2.2.14.3 转基因植株的qRT-PCR分析荧光定量PCR分析第32页
        2.2.15 激素诱导表达分析第32页
        2.2.16 转基因番茄生长发育特征分析第32-34页
            2.2.16.1 纵径和横径第32-33页
            2.2.16.2 果形指数第33页
            2.2.16.3 MdHMGR1对番茄果实发育的影响第33页
            2.2.16.4 番茄植株不同部位中细胞分裂素和生长素的含量第33-34页
        2.2.17 转基因植株逆境生理指标测定第34-36页
            2.2.17.1 叶绿素和类胡萝卜素含量的测定第34页
            2.2.17.2 抗氧化酶活性的测定第34-36页
3 结果与分析第36-47页
    3.1 表达载体的构建第36-37页
    3.2 转基因番茄的鉴定及基因的表达分析第37-39页
        3.2.1 基因组水平鉴定第37-38页
        3.2.2 转录水平鉴定第38-39页
    3.3 苹果HMGR基因家族的表达模式分析第39-40页
        3.3.1 MdHMGR1在转基因番茄的组织表达分析第39页
        3.3.2 MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄的激素诱导表达分析第39-40页
    3.4 转基因番茄果实的生长发育特征分析第40-44页
        3.4.1 MdHMGR1诱导转基因番茄根的伸长第40-41页
        3.4.2 转基因番茄果实发育过程中的表型分析第41-43页
            3.4.2.1 番茄果实发育过程中果实型状的变化第42页
            3.4.2.2 转基因番茄果实的发育第42-43页
        3.4.3 MdHMGR1-1+HMGR1番茄植株的幼果中有较高的CTK、IAA含量第43-44页
    3.5 盐胁迫对转基因番茄的影响第44-47页
        3.5.1 过量表达MdHMGR1提高了转基因番茄叶绿素、类胡萝卜素含量第44-45页
        3.5.2 过表达MdHMGR1提高了转基因番茄抗氧化酶活性第45-47页
4 讨论第47-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-56页
致谢第56页

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