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水稻SNARE蛋白基因OsSYP121在抗稻瘟病中的作用

摘要第1-13页
ABSTRACT第13-17页
第一部分 文献综述第17-41页
 第一章 水稻-稻瘟病菌互作机制的研究进展第17-33页
  1 水稻稻瘟病第17-20页
   ·水稻稻瘟病的危害第17-18页
   ·水稻稻瘟病的病症第18-20页
     ·叶瘟第18-19页
     ·叶枕瘟第19页
     ·节瘟第19页
     ·穗颈瘟和穗瘟第19-20页
  2 稻瘟病菌的致病机理第20-26页
   ·稻瘟病病菌的分类地位第20页
   ·Magnoporth oryzae的特征第20-21页
   ·稻瘟病菌的生活史和病害循环第21页
   ·稻瘟病菌的侵染机制第21-22页
   ·分生孢子的附着和萌发第22-26页
     ·调控附着胞生成的信号转导模式第23-24页
     ·附着胞的发育和功能第24页
     ·稻瘟病菌侵入后生长第24-26页
     ·稻瘟病菌在寄主中的定殖第26页
  3 水稻的先天免疫系统第26-33页
   ·病原相关分子模式触发的免疫反应第27-30页
     ·几丁质触发的水稻PTI第27-28页
     ·几丁质受体的下游调控元件第28-30页
   ·效应因子触发的免疫反应中的效应因子和R蛋白第30-32页
     ·基于效应因子和R蛋白的水稻-稻瘟病菌免疫反应第30页
     ·NBS-LRR识别效应子的方式第30-31页
     ·水稻R蛋白的信号途径第31-32页
   ·PTI与ETI间的重叠第32-33页
 第二章 SNARE蛋白在植物中的功能研究第33-41页
  1 SNARE蛋白第33-36页
   ·SNARE的结构与分类第33-36页
   ·SNARE介导膜融合的过程第36页
  2 植物SNARE家族第36-38页
   ·植物Q-SNARE第36-37页
   ·植物R-SNARE第37-38页
  3 植物SNARE的生物学功能第38-40页
   ·与胞质分裂有关第38页
   ·与向重力性有关第38页
   ·与脂质筏有关第38-39页
   ·与植物的抗病性有关第39页
   ·参与非生物胁迫和ABA信号途径第39-40页
  4 展望第40页
  5 本研究的目的与意义第40-41页
第二部分 研究报告第41-95页
 第三章 水稻SYPls基因的鉴定和功能分析第41-57页
  1 材料与方法第42-45页
   ·植物材料及处理第42页
   ·总RNA的提取和cDNA第一链的合成第42页
   ·Quantitative Real-time PCR分析第42-43页
   ·序列检索和生物信息学分析第43页
   ·细胞定位分析第43-45页
     ·载体构建第43-44页
     ·水稻原生质体转化第44-45页
  2 结果与分析第45-54页
   ·水稻SYP1家族基因的鉴定第45-49页
     ·保守结构域分析第47-48页
     ·系统发育和内含子/外显子结构分析第48-49页
   ·OsSYP1s在水稻中的组织表达模式各不相同第49-50页
   ·OsSYP1s在稻瘟病菌接种前后的诱导表达第50-51页
   ·OsSYP1s的亚细胞定位第51-54页
  3 讨论第54-57页
 第四章 水稻OsSYP121在抗稻瘟病中的作用第57-79页
  1 材料和方法第57-65页
   ·植物材料第57-58页
   ·植物材料的处理第58-59页
   ·总RNA的提取和cDNA第一链的合成第59页
   ·Quantitative Real-time PCR分析第59页
   ·PCR扩增OsSYP121的编码区和启动子序列第59-60页
     ·目的片段的PCR扩增第59页
     ·PCR反应产物的回收、测序与序列比对分析第59-60页
   ·水稻转基因植株的获得及鉴定第60-63页
     ·SYP121过量表达转基因植株的获得及鉴定第60-63页
     ·OsSYP121干涉表达转基因植株的获得及鉴定第63页
   ·T_2代转基因植株农艺性状考察第63页
   ·T_3代转基因植株对稻瘟病病菌的抗性鉴定第63-64页
   ·Uvitex染色第64-65页
  2 结果与分析第65-75页
   ·OsSYP121基因组序列分析第65-68页
     ·植物中的SYP121蛋白高度保守第65-66页
     ·不同水稻品种中OsSYP121启动子序列存在差异第66-68页
   ·OsSYP121转基因材料的获得及验证第68-71页
     ·OsSYP121过量表达转基因水稻植株的检测第68-69页
     ·OsSYP121干涉抑制表达植株的获得和检测第69-71页
   ·OsSYP121转基因水稻植株农艺性状考察第71-72页
   ·OsSYP121在水稻稻瘟病抗性上的作用第72-75页
  3 讨论第75-79页
 第五章 水稻OsSYP121互作蛋白的鉴定第79-95页
  1 材料与方法第80-86页
   ·DUALmembrane系统筛选OsSYP121互作蛋白第80-85页
     ·植物材料第80页
     ·植物材料的处理第80页
     ·cDNA文库的构建第80页
     ·pBT3-N-OsSYP121诱饵载体的构建第80页
     ·酵母感受态细胞的制备和转化第80-81页
     ·转录自激活活性检测第81页
     ·阳性克隆的初步筛选第81-84页
     ·回转验证第84页
     ·阳性克隆的序列分析第84-85页
   ·酵母双杂交体系鉴定SNARE蛋白核心复合体成员第85-86页
     ·载体构建第85页
     ·pGBKT7-OsSYP121质粒转化酵母菌株AH109第85-86页
     ·OsSYP121诱饵蛋白的自激活检测第86页
     ·捕获质粒转入携带pGBKT7-OsSYP121质粒的AH109酵母菌株第86页
   ·DUALmembrane酵母双杂交系统鉴定SNARE蛋白核心复合体成员第86页
     ·载体构建第86页
     ·捕获载体转入携带pBT3-N-OsSYP121质粒的酵母菌株NMY51第86页
  2 结果与分析第86-93页
   ·利用DUALmembrane系统筛选水稻SNARE蛋白SYP121互作子第86-91页
     ·诱饵蛋白OsSYP121的转录自激活检测第87-88页
     ·阳性克隆的初步筛选第88-89页
     ·回转验证第89-91页
   ·鉴定OsSYP121与OsSNAP32以及OsVAMP724/714互作第91-93页
  3 讨论第93-95页
全文结论第95-97页
全文创新点第97-99页
附录第99-109页
参考文献第109-125页
攻读博士期间发表的论文第125-127页
致谢第127页

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