| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-17页 |
| ·VP1蛋白 | 第13页 |
| ·MAT1蛋白(menage a trios 1) | 第13-15页 |
| ·本论文研究基础及研究意义 | 第15-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·材料 | 第17-22页 |
| ·细胞株、病毒株、质粒 | 第17页 |
| ·抗体 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·主要的溶液成分和试剂的配制 | 第20-22页 |
| ·方法 | 第22-33页 |
| ·真核质粒pBudCE4.1-VP1-D4、pBudCE4.1-VP1-D8的构建 | 第22-26页 |
| ·Hela细胞培养 | 第26页 |
| ·Turbofect进行质粒转染 | 第26页 |
| ·Western blot检测质粒MAT1在Hela细胞中的表达情况 | 第26-28页 |
| ·病毒感染 | 第28页 |
| ·Quantative Real-Time RT-PCR | 第28-31页 |
| ·流式细胞仪检测四种质粒对Hela细胞周期的影响 | 第31-32页 |
| ·图像分析及统计学检验方法 | 第32-33页 |
| 第3章 结果 | 第33-46页 |
| ·质粒pBudCE4.1-VP1-D4、pBudCE4.1-VP1-D8的构建 | 第33-35页 |
| ·pBudCE4.1-VP1-D4、pBudCE4.1-VP1-D8基因的扩增 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切分析 | 第33-34页 |
| ·pBudCE4.1-VP1-D8、pBudCE4.1-VP1-D4基因测序 | 第34-35页 |
| ·质粒pBudCE4.1-VP1、pBudCE4.1-VP1-D8和pBudCE 4.1- VP1-D4对细胞中MAT1表达量的影响 | 第35-36页 |
| ·Western blot分析质粒转染细胞后MAT1蛋白的表达情况 | 第35-36页 |
| ·流式细胞仪检测pBudCE4.1-VP1、pBudCE4.1-VP1-D8和pBudCE4.1-VP1-D4对细胞周期的影响 | 第36-38页 |
| ·Quantitive RT-PCR检测质粒pBudCE4.1-VP1转染Hela细胞对细胞周期检查点基因mRNA的的影响 | 第38-43页 |
| ·总RNA的质量 | 第38页 |
| ·实时定量PCR反应的特异性扩增 | 第38-39页 |
| ·pBudCE4.1-VP1质粒转染组细胞中CDK4、CDK6、Cyclin D1、Cyclin D2、Cyclin D3、CDK2、Cyclin E1、Cyclin E2、Cyclin A1、p21、p27和CDC25A基因mRNA表达水平 | 第39-40页 |
| ·四种质粒转染组细胞中CDK4、Cyclin D1、CDK2和p21基因mRNA表达水平 | 第40-42页 |
| ·Quantitive RT-PCR检测CVB3感染Hela细胞 3 h、6 h、9 h对CDK4、Cyclin D1、CDK2和p21基因mRNA的影响 | 第42-43页 |
| ·质粒pBudCE4.1-VP1、pBudCE4.1-VP1-D8和pBudCE4.1-VP1-D4对Rb磷酸化水平的影响 | 第43-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-53页 |
| ·VP1与MAT1相互作用对细胞产生的影响及机制 | 第46-47页 |
| ·细胞周期阻滞于G1/S期的机制 | 第47-50页 |
| ·Rb的磷酸化在调控细胞周期中的作用机制 | 第50-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 第6章 创新性 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附图 1 | 第61-63页 |
| 附图 2 | 第63-66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66-67页 |
| 综述 | 第67-74页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
