| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 绪论 | 第11-17页 |
| ·课题背景 | 第11页 |
| ·犬瘟热病病原学 | 第11-13页 |
| ·犬瘟热病毒的形态和理化特性 | 第11-12页 |
| ·犬瘟热病毒基因组结构 | 第12-13页 |
| ·犬瘟热病毒基因编码的结构蛋白 | 第13页 |
| ·犬瘟热流行病学 | 第13-14页 |
| ·犬瘟热病临床症状 | 第14页 |
| ·犬瘟热病诊断技术 | 第14-15页 |
| ·包涵体检查 | 第14页 |
| ·病毒分离培养 | 第14-15页 |
| ·电镜诊断 | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15页 |
| ·免疫荧光抗体(FA)染色法 | 第15页 |
| ·RT-PCR检测 | 第15页 |
| ·犬瘟热病毒疫苗 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 犬瘟热毒株CDV/R-20/12的分离鉴定 | 第17-29页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·实验用动物 | 第17页 |
| ·主要器材与设备 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要溶液配制 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-25页 |
| ·样品的采集与处理 | 第20页 |
| ·病毒分离培养 | 第20-21页 |
| ·TCID_(50)测定 | 第21页 |
| ·病毒中和试验 | 第21页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第21-23页 |
| ·测序鉴定 | 第23-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-27页 |
| ·病毒分离结果 | 第25页 |
| ·TCID_(50)测定结果 | 第25-26页 |
| ·中和试验结果 | 第26页 |
| ·RT-PCR鉴定结果 | 第26-27页 |
| ·F基因测序结果 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-29页 |
| 3 犬瘟热野毒株的分离鉴定 | 第29-37页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·病料 | 第29页 |
| ·仪器设备及试剂 | 第29页 |
| ·主要溶液配制 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·病料剖检处理及核酸提取 | 第29-30页 |
| ·筛选阳性样本 | 第30页 |
| ·采集乌苏里貉外周血 | 第30页 |
| ·淋巴细胞的分离 | 第30-31页 |
| ·淋巴细胞计数 | 第31页 |
| ·淋巴细胞染色 | 第31页 |
| ·淋巴细胞培养 | 第31页 |
| ·病毒培养 | 第31-32页 |
| ·毒株CDV/R-20/12的Vero细胞再培养 | 第32页 |
| ·免疫荧光试验鉴定 | 第32页 |
| ·培养病毒的PCR检测 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·样本筛选ARMS-PCR扩增结果 | 第33页 |
| ·淋巴细胞分离结果 | 第33-34页 |
| ·淋巴细胞计数结果 | 第34页 |
| ·病毒分离结果 | 第34-35页 |
| ·免疫荧光结果 | 第35-36页 |
| ·病毒PCR检测结果 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 4 犬瘟热弱毒株CDV/R-20/12部分生物学特性研究 | 第37-43页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·主要仪器与设备 | 第37页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·多重PCR(ARMS-PCR)区分病毒的强弱毒株 | 第37页 |
| ·免疫原性试验 | 第37页 |
| ·致病性试验 | 第37-38页 |
| ·同居感染试验 | 第38页 |
| ·毒力返强试验 | 第38页 |
| ·抗体效价跟踪监测 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·ARMS-PCR | 第39-40页 |
| ·免疫原性试验 | 第40页 |
| ·致病性试验结果 | 第40-41页 |
| ·同居感染试验结果 | 第41页 |
| ·毒力返强试验结果 | 第41页 |
| ·抗体效价监测结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 5 犬瘟热野毒株F基因序列测定及进化树分析 | 第43-54页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·病料 | 第43页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·样本RNA的提取及反转录 | 第43页 |
| ·引物合成 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR产物电泳检测 | 第44页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·目的基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·阳性重组子的筛选与测序 | 第45页 |
| ·建立F基因进化树 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·PCR扩增结果 | 第46页 |
| ·PCR产物胶回收结果 | 第46-47页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第47页 |
| ·F基因序列测定结果 | 第47页 |
| ·F基因序列比对 | 第47-48页 |
| ·进化树的建立 | 第48-49页 |
| ·F蛋白序列比对 | 第49-51页 |
| ·抗原预测分析 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |