摘要 | 第1-7页 |
Summary | 第7-9页 |
第一章 文献综述 | 第9-19页 |
1 文献综述 | 第9-19页 |
·传染性造血器官坏死病概况 | 第9-14页 |
·IHNV 的发现、分布及危害 | 第9页 |
·IHNV 的病原学特征 | 第9-11页 |
·IHNV 基因组特征 | 第11页 |
·IHNV 疾病表现 | 第11-12页 |
·鱼弹状病毒的先天免疫反应 | 第12-13页 |
·鱼弹状病毒体液免疫反应 | 第13-14页 |
·杆状病毒表达系统研究进展 | 第14-17页 |
·杆状病毒表达系统简介 | 第14-15页 |
·杆状病毒表达系统特点 | 第15-16页 |
·宿主昆虫细胞培养条件 | 第16-17页 |
·杆状病毒表达影响因素 | 第17页 |
·目的意义和研究内容 | 第17-19页 |
第二章 IHNV 的纯化及抗血清制备 | 第19-27页 |
1 材料与方法 | 第19-23页 |
·材料 | 第19-20页 |
·病毒、细胞和实验动物 | 第19页 |
·试剂与培养液 | 第19-20页 |
·主要仪器 | 第20页 |
·方法 | 第20-23页 |
·细胞和病毒的体外培养 | 第20页 |
·RT-PCR 及扩增产物检测 | 第20-21页 |
·病毒滴度(TCID50)测定 | 第21-22页 |
·病毒生长曲线的测定 | 第22页 |
·病毒的超离和纯化 | 第22页 |
·抗 IHNV 鼠血清的制备 | 第22页 |
·抗 IHNV 病毒血清效价的测定 | 第22-23页 |
2 结果 | 第23-25页 |
·IHNV 的增殖及纯化 | 第23页 |
·RT-PCR 检测 | 第23-24页 |
·病毒生长曲线测定 | 第24页 |
·小鼠抗 IHNV 血清效价的测定 | 第24-25页 |
3 讨论 | 第25-26页 |
4 小结 | 第26-27页 |
第三章 IHNV 核蛋白(N)表达、纯化和抗体制备 | 第27-48页 |
1 材料与方法 | 第27-41页 |
·材料 | 第27-31页 |
·载体与菌株 | 第27-28页 |
·主要试剂 | 第28页 |
·Sf9 细胞培养相关试剂 | 第28页 |
·培养基 | 第28-29页 |
·酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂 | 第29页 |
·免疫荧光检测(IFA)试剂 | 第29页 |
·免疫印迹试验(Western-blot)试剂 | 第29-30页 |
·蛋白纯化试验试剂 | 第30页 |
·主要器材 | 第30-31页 |
·实验方法 | 第31-41页 |
·pMD-N 质粒构建 | 第31-34页 |
·杆状病毒表达载体的构建 | 第34-36页 |
·pFB-N-BAC 的构建 | 第36-38页 |
·重组病毒的获得 | 第38-39页 |
·蛋白的表达纯化与检测 | 第39-41页 |
2 结果与分析 | 第41-45页 |
·引物扩增结果 | 第41页 |
·pFB-N-BAC 阳性克隆鉴定 | 第41-42页 |
·IFA 鉴定结果 | 第42-43页 |
·Western-blot 鉴定结果 | 第43页 |
·N 蛋白的纯化 | 第43-44页 |
·蛋白质浓度测定 | 第44页 |
·IHNV N 蛋白抗血清与全病毒反应 | 第44-45页 |
3 讨论 | 第45-47页 |
·成功构建 N 蛋白杆状病毒表达载体 | 第45-46页 |
·重组蛋白的表达与鉴定 | 第46-47页 |
4 小结 | 第47-48页 |
第四章 IHNV G 基因杆状病毒表达系统载体的构建及表达鉴定 | 第48-65页 |
1 材料与方法 | 第48-58页 |
·材料 | 第48-51页 |
·载体与菌株 | 第48-49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·Sf9 细胞培养相关试剂 | 第49页 |
·培养基 | 第49-50页 |
·免疫荧光检测(IFA)试剂 | 第50页 |
·免疫印迹试验(Western-blot)试剂 | 第50-51页 |
·实验方法 | 第51-58页 |
·IHNV G 基因克隆 | 第51-53页 |
·杆状病毒表达载体的构建 | 第53-55页 |
·pFB-G-BAC 的构建 | 第55-57页 |
·重组病毒的获得 | 第57页 |
·蛋白的表达与检测 | 第57-58页 |
2 结果与分析 | 第58-62页 |
·引物扩增结果 | 第58-59页 |
·pFB-G -BAC 阳性克隆鉴定 | 第59-60页 |
·重组蛋白的生物学鉴定 | 第60-62页 |
·IFA 鉴定结果 | 第60-61页 |
·Western-blot 鉴定结果 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62-64页 |
·Sf9 细胞的转染 | 第62-63页 |
·重组蛋白的表达与鉴定 | 第63-64页 |
4 小结 | 第64-65页 |
全文结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
个人简介 | 第73-74页 |
导师简介 | 第74-75页 |