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IHNV N和G基因在杆状病毒表达系统中的表达及抗体制备

摘要第1-7页
Summary第7-9页
第一章 文献综述第9-19页
 1 文献综述第9-19页
   ·传染性造血器官坏死病概况第9-14页
     ·IHNV 的发现、分布及危害第9页
     ·IHNV 的病原学特征第9-11页
     ·IHNV 基因组特征第11页
     ·IHNV 疾病表现第11-12页
     ·鱼弹状病毒的先天免疫反应第12-13页
     ·鱼弹状病毒体液免疫反应第13-14页
   ·杆状病毒表达系统研究进展第14-17页
     ·杆状病毒表达系统简介第14-15页
     ·杆状病毒表达系统特点第15-16页
     ·宿主昆虫细胞培养条件第16-17页
     ·杆状病毒表达影响因素第17页
   ·目的意义和研究内容第17-19页
第二章 IHNV 的纯化及抗血清制备第19-27页
 1 材料与方法第19-23页
   ·材料第19-20页
     ·病毒、细胞和实验动物第19页
     ·试剂与培养液第19-20页
     ·主要仪器第20页
   ·方法第20-23页
     ·细胞和病毒的体外培养第20页
     ·RT-PCR 及扩增产物检测第20-21页
     ·病毒滴度(TCID50)测定第21-22页
     ·病毒生长曲线的测定第22页
     ·病毒的超离和纯化第22页
     ·抗 IHNV 鼠血清的制备第22页
     ·抗 IHNV 病毒血清效价的测定第22-23页
 2 结果第23-25页
   ·IHNV 的增殖及纯化第23页
   ·RT-PCR 检测第23-24页
   ·病毒生长曲线测定第24页
   ·小鼠抗 IHNV 血清效价的测定第24-25页
 3 讨论第25-26页
 4 小结第26-27页
第三章 IHNV 核蛋白(N)表达、纯化和抗体制备第27-48页
 1 材料与方法第27-41页
   ·材料第27-31页
     ·载体与菌株第27-28页
     ·主要试剂第28页
     ·Sf9 细胞培养相关试剂第28页
     ·培养基第28-29页
     ·酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂第29页
     ·免疫荧光检测(IFA)试剂第29页
     ·免疫印迹试验(Western-blot)试剂第29-30页
     ·蛋白纯化试验试剂第30页
     ·主要器材第30-31页
   ·实验方法第31-41页
     ·pMD-N 质粒构建第31-34页
     ·杆状病毒表达载体的构建第34-36页
     ·pFB-N-BAC 的构建第36-38页
     ·重组病毒的获得第38-39页
     ·蛋白的表达纯化与检测第39-41页
 2 结果与分析第41-45页
   ·引物扩增结果第41页
   ·pFB-N-BAC 阳性克隆鉴定第41-42页
   ·IFA 鉴定结果第42-43页
   ·Western-blot 鉴定结果第43页
   ·N 蛋白的纯化第43-44页
   ·蛋白质浓度测定第44页
   ·IHNV N 蛋白抗血清与全病毒反应第44-45页
 3 讨论第45-47页
   ·成功构建 N 蛋白杆状病毒表达载体第45-46页
   ·重组蛋白的表达与鉴定第46-47页
 4 小结第47-48页
第四章 IHNV G 基因杆状病毒表达系统载体的构建及表达鉴定第48-65页
 1 材料与方法第48-58页
   ·材料第48-51页
     ·载体与菌株第48-49页
     ·主要试剂第49页
     ·Sf9 细胞培养相关试剂第49页
     ·培养基第49-50页
     ·免疫荧光检测(IFA)试剂第50页
     ·免疫印迹试验(Western-blot)试剂第50-51页
   ·实验方法第51-58页
     ·IHNV G 基因克隆第51-53页
     ·杆状病毒表达载体的构建第53-55页
     ·pFB-G-BAC 的构建第55-57页
     ·重组病毒的获得第57页
     ·蛋白的表达与检测第57-58页
 2 结果与分析第58-62页
   ·引物扩增结果第58-59页
   ·pFB-G -BAC 阳性克隆鉴定第59-60页
   ·重组蛋白的生物学鉴定第60-62页
     ·IFA 鉴定结果第60-61页
     ·Western-blot 鉴定结果第61-62页
 3 讨论第62-64页
   ·Sf9 细胞的转染第62-63页
   ·重组蛋白的表达与鉴定第63-64页
 4 小结第64-65页
全文结论第65-66页
参考文献第66-72页
致谢第72-73页
个人简介第73-74页
导师简介第74-75页

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