| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 淡水鱼类主要病毒性疾病 | 第10-19页 |
| 2 鲤疱疹病毒Ⅱ型研究现状 | 第19-22页 |
| ·国内外流行现状 | 第19-20页 |
| ·临床症状与病理特征 | 第20页 |
| ·诊断方法研究进展 | 第20-22页 |
| ·电子显微技术 | 第20页 |
| ·细胞培养 | 第20-21页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第21页 |
| ·PCR | 第21页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第21页 |
| ·环介导等温扩增 | 第21页 |
| ·免疫相关研究进展 | 第21-22页 |
| 3 结语 | 第22-23页 |
| 4 本研究的主要目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 试验研究 | 第24-54页 |
| 试验一 鲤疱疹病毒Ⅱ型常规 PCR 检测方法的建立及应用 | 第24-30页 |
| 1 试验材料 | 第24页 |
| ·主要试验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-26页 |
| ·引物设计和合成 | 第24-25页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第25页 |
| ·PCR 扩增及条件优化 | 第25-26页 |
| ·灵敏性试验 | 第26页 |
| ·特异性试验 | 第26页 |
| ·PCR 检测方法的初步应用 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-28页 |
| ·PCR 最佳反应条件 | 第26-27页 |
| ·敏感性检测结果 | 第27页 |
| ·特异性检测结果 | 第27-28页 |
| ·PCR 对临床样品检测结果 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 试验二 鲤疱疹病毒Ⅱ型双重PCR快速检测方法的建立及应用 | 第30-37页 |
| 1 试验材料 | 第30页 |
| ·主要试验材料 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-32页 |
| ·引物设计和合成 | 第30-31页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第31页 |
| ·双重 PCR 扩增及条件优化 | 第31-32页 |
| ·灵敏性试验 | 第32页 |
| ·特异性试验 | 第32页 |
| ·双重 PCR 检测方法的初步应用 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·双重 PCR 最佳反应条件 | 第32-33页 |
| ·最佳镁离子浓度 | 第32页 |
| ·最佳退火温度 | 第32-33页 |
| ·敏感性检测结果 | 第33-34页 |
| ·特异性检测结果 | 第34页 |
| ·临床样品检测结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 试验三 SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鲤疱疹病毒Ⅱ型检测方法的建立及应用 | 第37-47页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| ·病毒株 | 第37页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-44页 |
| ·引物设计及合成 | 第38页 |
| ·模板制备 | 第38页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第38页 |
| ·重组质粒的制备 | 第38-43页 |
| ·荧光定量 PCR 反应体系的优化 | 第43页 |
| ·荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第43页 |
| ·灵敏性试验 | 第43页 |
| ·特异性试验 | 第43页 |
| ·临床样品检测 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·反应条件的优化 | 第44页 |
| ·标准曲线图的建立 | 第44-45页 |
| ·CyHV-Ⅱ荧光定量 PCR 的灵敏度 | 第45页 |
| ·临床样品检测结果 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 试验四 鲤疱疹病毒Ⅱ型LAMP检测方法的建立及应用 | 第47-54页 |
| 1 试验材料 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试验试剂 | 第47-48页 |
| 2 试验方法 | 第48-49页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·标准 CyHV-Ⅱ DNA 的制备 | 第48页 |
| ·LAMP 和普通 PCR | 第48-49页 |
| ·LAMP 的敏感性和特异性 | 第49页 |
| ·LAMP 临床样品的检测率 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-52页 |
| ·LAMP 反应条件的优化 | 第49-51页 |
| ·灵敏度的 LAMP 和 PCR 分析 | 第51页 |
| ·LAMP 检测 CyHV-Ⅱ的特异性 | 第51-52页 |
| ·LAMP 和 PCR 反应的适用性 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三部分 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 个人简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-64页 |
