| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·生物酶在生物脱墨方面的应用 | 第10-15页 |
| ·内切型葡聚糖酶在制浆造纸中的应用 | 第11-13页 |
| ·漆酶在制浆造纸中的应用 | 第13-15页 |
| ·融合酶研究概况 | 第15-17页 |
| ·融合酶的优势 | 第16页 |
| ·通过连接肽的顺序融合 | 第16页 |
| ·柔性连接肽 | 第16页 |
| ·α螺旋连接肽 | 第16页 |
| ·抗蛋白酶降解的连接肽 | 第16页 |
| ·其它连接肽 | 第16页 |
| ·融合酶在生物质多糖降解上的应用 | 第16-17页 |
| ·高温真菌 | 第17-18页 |
| ·高温真菌研究概况 | 第17-18页 |
| ·Melanocarpus albomyces 研究概况 | 第18页 |
| ·本文研究意义与内容 | 第18-20页 |
| ·本文研究意义 | 第18-19页 |
| ·本文研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 Melanocarpus albomyces 内切葡聚糖酶基因 Maeg、漆酶基因 Malac 在毕赤酵母中 的表达以及酶学性质研究 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株及质粒 | 第20页 |
| ·药品与酶 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20-21页 |
| ·溶液和培养基 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·Maeg、Malac 的序列分析 | 第22页 |
| ·原基因信号肽分析 | 第22-23页 |
| ·含有双酶切位点的 Maeg、Malac 基因的扩增 | 第23页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第23-24页 |
| ·表达载体的构建 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第24-25页 |
| ·测序 | 第25-26页 |
| ·质粒碱法大量提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第26-27页 |
| ·重组质粒转入巴斯德毕赤酵母 | 第27页 |
| ·重组酵母上清液中表达蛋白的定量检测 | 第27-31页 |
| ·液体培养 | 第27页 |
| ·表达蛋白的亲和纯化 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测纯化效果 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的酶学性质研究 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-41页 |
| ·Maeg、Malac 序列分析及合成 | 第31-33页 |
| ·含有酶切位点 EcoRI-Maeg-SacII 和 SacII-Malac-XbaI 基因的扩增 | 第33-34页 |
| ·Maeg、Malac 阳性克隆筛选 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒转化酵母 KM71H | 第35-36页 |
| ·表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第36-37页 |
| ·表达蛋白的酶学性质 | 第37-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 Melanocarpus albomyces 内切葡聚糖酶基因 Maeg 和漆酶基因 Malac 在毕赤酵母中 的融合表达 | 第42-59页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·药品与酶 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-49页 |
| ·MaEG 与 MaLac 融合酶的构建 | 第43-45页 |
| ·引物的设计 | 第45-46页 |
| ·PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第47-48页 |
| ·表达载体的构建 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第48页 |
| ·测序 | 第48-49页 |
| ·质粒碱法大量提取 | 第49页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第49页 |
| ·重组质粒转入巴斯德毕赤酵母 | 第49页 |
| ·重组酵母上清液中表达蛋白的定量检测 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-57页 |
| ·以 pPICZαA-Malac-(G4S)3-Maeg 为代表，融合酶重组质粒的构建 | 第49-51页 |
| ·重组表达质粒转化酵母 KM71H | 第51-52页 |
| ·蛋白的诱导表达及纯化 | 第52-53页 |
| ·表达蛋白的酶学性质 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 重组毕赤酵母漆酶表达条件的优化及高密度发酵 | 第59-68页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·菌株及质粒 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·高密度发酵流加溶液 | 第60页 |
| ·实验药品 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·单因素对表达的影响 | 第61页 |
| ·高密度发酵工艺的方法 | 第61-62页 |
| ·高密度发酵发酵液分析 | 第62-63页 |
| ·发酵结果与讨论 | 第63-67页 |
| ·单因素对表达的影响 | 第63-65页 |
| ·高密度发酵结果 | 第65-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 融合酶与亲本酶脱墨性能的初步研究 | 第68-73页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69页 |
| ·纸浆预处理 | 第69页 |
| ·油墨点数、白度的测定方法 | 第69页 |
| ·不同 pH 油墨总数、白度的影响 | 第69页 |
| ·不同温度对油墨总数、白度的影响 | 第69页 |
| ·酶液的培养及纯化 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-71页 |
| ·融合酶 MaLac-(G4S)3-MaEG 以及亲本酶 MaLac,MaEG 废纸脱墨的白度 | 第69-70页 |
| ·融合酶 MaLac-(G4S)3-MaEG 以及亲本酶 MaLac,MaEG 废纸脱墨的油墨点数 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第六章 总结与展望 | 第73-75页 |
| ·总结 | 第73-74页 |
| ·展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附录 | 第80-88页 |
