| 致谢 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1. SO_2对植物的危害 | 第11-15页 |
| ·SO_2对植物的影响 | 第11页 |
| ·二氧化硫对植物的危害 | 第11-13页 |
| ·SO_2对超微结构的影响 | 第11页 |
| ·伤害症状 | 第11-12页 |
| ·伤害机理 | 第12页 |
| ·生理生化的影响 | 第12-13页 |
| ·对生长发育的影响 | 第13页 |
| ·SO_2抗性基因的研究 | 第13-15页 |
| ·忍耐性 | 第13页 |
| ·屏蔽性 | 第13-15页 |
| 2. 亚硫酸盐氧化酶(sulfite oxidase,SO)概述 | 第15-17页 |
| ·硫的形态和重要性 | 第15-16页 |
| ·钼酶SO的性质 | 第16页 |
| ·植物SO的结构特征 | 第16-17页 |
| ·植物SO的生化特性 | 第17页 |
| 3. 植物启动子的研究 | 第17-19页 |
| ·启动子克隆方法 | 第18-19页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第18页 |
| ·反向PCR方法 | 第18页 |
| ·锅柄PCR技术 | 第18页 |
| ·锚定PCR技术 | 第18-19页 |
| ·启动子功能研究方法 | 第19页 |
| ·转化分析 | 第19页 |
| ·瞬间表达分析 | 第19页 |
| ·点突变分析 | 第19页 |
| 4. 植物转基因方法概述 | 第19-26页 |
| ·载体介导法 | 第20-22页 |
| ·农杆菌介导法 | 第20-21页 |
| ·病毒介导法 | 第21页 |
| ·拟南芥的花序浸染法 | 第21-22页 |
| ·DNA直接导入法 | 第22-26页 |
| ·基因枪法 | 第22页 |
| ·显微注射法 | 第22-23页 |
| ·超声波介导法 | 第23页 |
| ·PEG介导法 | 第23页 |
| ·脂质体介导法 | 第23-24页 |
| ·电激法 | 第24页 |
| ·脉冲电泳法 | 第24页 |
| ·花粉管通道法 | 第24-26页 |
| 5. 引言 | 第26-27页 |
| 第二章 ZmSO在不同胁迫下的表达模式分析 | 第27-34页 |
| 1. 材料 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·试剂和酶 | 第27页 |
| 2. 方法 | 第27-30页 |
| ·材料的处理 | 第27-28页 |
| ·RNA的提取及纯化 | 第28-29页 |
| ·RNA纯化 | 第28页 |
| ·RNA纯化体系 | 第28-29页 |
| ·荧光real-time PCR进行表达分析 | 第29-30页 |
| ·荧光real-time PCR体系 | 第29页 |
| ·荧光real-time PCR程序 | 第29-30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-32页 |
| ·ZmSO在不同胁迫下的表达分析 | 第30-32页 |
| 4. 小结与讨论 | 第32-34页 |
| ·小结 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 玉米亚硫酸氧化酶(ZmSO)启动子分离及功能分析 | 第34-47页 |
| 1. 材料 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·载体 | 第34页 |
| ·常用菌种 | 第34-35页 |
| 2. 方法 | 第35-38页 |
| ·常用培养基和溶液试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·培养基配制 | 第35页 |
| ·试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·目的基因的制备 | 第36-37页 |
| ·目的基因扩增 | 第36-37页 |
| ·目的基因的回收 | 第37页 |
| ·限制性酶切目的基因 | 第37页 |
| ·带有GUS的植物表达载体制备 | 第37页 |
| ·带有GUS的植物表达载体提取 | 第37页 |
| ·限制性酶切带有GUS的植物表达载体 | 第37页 |
| ·重组载体构建(ZmSO-P、ZmSO-P1、ZmSO-P2) | 第37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第37页 |
| ·菌落PCR | 第37页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第37页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第37-38页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·ZmSO启动子生物信息学分析 | 第38-39页 |
| ·ZmSO启动子载体的构建、转化与转基因植株的检测 | 第39-42页 |
| ·叶盘转化法获得ZmSO启动子转基因珊西烟植株并检测 | 第42-44页 |
| ·GUS组织化学染色结果 | 第44-45页 |
| 4. 小结与讨论 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 ZmSO转基因拟南芥植株的获得及鉴定 | 第47-68页 |
| 1. 材料 | 第47-49页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·载体 | 第47页 |
| ·常用菌种 | 第47页 |
| ·western-blot试剂的配制 | 第47-49页 |
| 2. 植物表达载体P27-GFP：ZmSO的构建 | 第49-59页 |
| ·中间载体pRNAi69的构建 | 第50-52页 |
| ·目的基因扩增 | 第50-51页 |
| ·纯化,回收目的基因 | 第51页 |
| ·限制性内切酶酶切目的基因及回收 | 第51-52页 |
| ·pRNAi69制备 | 第52页 |
| ·质粒提取R69 | 第52页 |
| ·限制性酶切pRNAi69 | 第52页 |
| ·重组载体构建 | 第52-53页 |
| ·连接 | 第52页 |
| ·DH10B感受态的制备 | 第52-53页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第53页 |
| ·菌落PCR | 第53页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第53页 |
| ·重组载体构建(pRNAi69-GFP：ZmSO) | 第53-54页 |
| ·GFP制备(无终止密码子) | 第53页 |
| ·酶切GFP和载体pRNAi69 | 第53页 |
| ·连接 | 第53页 |
| ·转化 | 第53页 |
| ·菌落PCR | 第53页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体p27的构建 | 第54页 |
| ·目的片段制备 | 第54页 |
| ·p27制备 | 第54页 |
| ·连接 | 第54页 |
| ·转化大肠杆菌DH10B | 第54页 |
| ·菌落PCR | 第54页 |
| ·质粒PCR和酶切鉴定 | 第54页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第54-55页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第54-55页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第55页 |
| ·菌落PCR检测 | 第55页 |
| ·拟南芥花序浸染Floral Dip法转化拟南芥 | 第55-56页 |
| ·拟南芥的种植 | 第55页 |
| ·Floral dip法转化拟南芥 | 第55-56页 |
| ·转基因拟南芥T1代筛选及验证 | 第56页 |
| ·转基因的验证 | 第56-57页 |
| ·转基因拟南芥DNA的提取及PCR检测 | 第56页 |
| ·拟南芥提取DNA的纯化 | 第56-57页 |
| ·PCR扩增体系验证 | 第57页 |
| ·转基因植株表达量的检测 | 第57-59页 |
| ·植物蛋白的提取 | 第57页 |
| ·配制蛋白胶 | 第57-58页 |
| ·电泳 | 第58页 |
| ·western-blot | 第58-59页 |
| ·水浴式电转移 | 第58-59页 |
| ·加入一抗 | 第59页 |
| ·加入二抗 | 第59页 |
| ·显色 | 第59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-67页 |
| ·ZmSO生物信息学分析 | 第59-61页 |
| ·玉米ZmSO全长cDNA的序列分析 | 第59-60页 |
| ·玉米ZmSO与其它物种SO的进化关系分析 | 第60-61页 |
| ·拟南芥(ATSO)突变体检测 | 第61-62页 |
| ·atso总RNA的提取 | 第61页 |
| ·atso表达量荧光定量分析 | 第61-62页 |
| ·ZmSO载体的构建、转化与转基因植株的检测 | 第62-64页 |
| ·ZmSO过量表达载体P27-GFP：ZmSO的构建 | 第62-64页 |
| ·拟南芥沾花法获得ZmSO转基因拟南芥植株并检测 | 第64-66页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第65页 |
| ·western-blot检测 | 第65-66页 |
| ·转基因植株的生理生化验证 | 第66-67页 |
| ·SO_2熏蒸实验 | 第66-67页 |
| 4. 小结与讨论 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| Abstract | 第75-76页 |
