| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-52页 |
| 1 卡拉胶 | 第15-23页 |
| ·卡拉胶来源 | 第15页 |
| ·卡拉胶结构 | 第15-16页 |
| ·卡拉胶分类 | 第16-17页 |
| ·卡拉胶理化性质 | 第17-20页 |
| ·卡拉胶的应用价值 | 第20-23页 |
| 2 卡拉胶寡糖 | 第23-30页 |
| ·卡拉胶寡糖的制备方法 | 第23-24页 |
| ·卡拉胶寡糖的分离纯化 | 第24-25页 |
| ·卡拉胶寡糖结构的鉴定方法 | 第25-28页 |
| ·卡拉胶寡糖的生物活性 | 第28-30页 |
| 3 卡拉胶酶 | 第30-42页 |
| ·卡拉胶酶的来源 | 第31页 |
| ·卡拉胶酶的分类 | 第31-40页 |
| ·卡拉胶酶的应用 | 第40-42页 |
| 4 蛋白质的结构与功能研究 | 第42-52页 |
| ·蛋白质的三维结构 | 第42-46页 |
| ·生物信息学手段在蛋白质结构和功能研究中的作用 | 第46-52页 |
| 第一章 Cellulophaga sp. QY3 中ι-卡拉胶酶 CgiA 的研究 | 第52-116页 |
| 第一节 ι-卡拉胶酶 CgiA 的降解方式研究 | 第52-60页 |
| 1 实验设计 | 第52-54页 |
| 2 仪器与材料 | 第54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·实验试剂及材料 | 第54页 |
| 3 实验方法 | 第54-57页 |
| ·糖含量的测定方法 | 第54-55页 |
| ·荧光辅助糖电泳方法 | 第55-56页 |
| ·酶解不同类型底物的降解时间曲线 | 第56-57页 |
| ·CgiA 降解不同类型底物的酶活力比较 | 第57页 |
| 4 实验结果 | 第57-60页 |
| ·酶解胶态和非胶态底物的酶活力比较 | 第57页 |
| ·酶解非胶态底物的降解时间曲线 | 第57-59页 |
| ·酶解胶态底物的降解时间曲线 | 第59-60页 |
| 5 小结与讨论 | 第60页 |
| 第二节 ι-卡拉胶酶 CgiA 的催化腔特征研究 | 第60-70页 |
| 1 实验设计 | 第61页 |
| 2 仪器与材料 | 第61-62页 |
| ·实验仪器 | 第61页 |
| ·实验试剂及材料 | 第61-62页 |
| 3 实验方法 | 第62-64页 |
| ·卡拉胶酶 CgiA 的同源模建 | 第62-63页 |
| ·卡拉胶酶 CgiA 的降解实验 | 第63-64页 |
| 4 实验结果 | 第64-69页 |
| ·卡拉胶酶 CgiA 的同源模建及结构分析 | 第64-66页 |
| ·卡拉胶酶 CgiA 的催化腔特征 | 第66-69页 |
| 5 小结与讨论 | 第69-70页 |
| 第三节 ι-卡拉胶酶 CgiA 重要残基的功能研究 | 第70-116页 |
| 1 实验设计 | 第70-72页 |
| 2 实验材料 | 第72-75页 |
| ·实验仪器 | 第72-73页 |
| ·实验菌株及培养基 | 第73页 |
| ·实验试剂及材料 | 第73-75页 |
| 3 实验方法 | 第75-93页 |
| ·GH82 家族ι卡拉胶酶的系统进化树构建 | 第75-77页 |
| ·GH82 家族ι卡拉胶酶的序列保守性分析 | 第77-78页 |
| ·ι卡拉胶酶 CgiA 的定点突变 | 第78-83页 |
| ·CgiA 及突变体表达载体的构建 | 第83-86页 |
| ·CgiA 及突变体的表达与纯化 | 第86-87页 |
| ·卡拉胶酶活力的测定 | 第87-90页 |
| ·重组蛋白纯度及浓度的检测 | 第90-91页 |
| ·酶促反应动力学常数测定 | 第91-93页 |
| ·CgiA 及突变体的三维结构分析 | 第93页 |
| 4 实验结果 | 第93-113页 |
| ·GH82 家族ι卡拉胶酶的系统进化树 | 第93-96页 |
| ·GH82 家族ι卡拉胶酶的序列保守性分析 | 第96-97页 |
| ·重组表达载体的体系构建 | 第97-99页 |
| ·CgiA 及突变体的表达和分离纯化 | 第99-100页 |
| ·卡拉胶酶活力测定方法的改进 | 第100-105页 |
| ·CgiA 催化腔-1 位保守残基的功能 | 第105-109页 |
| ·CgiA 催化腔+1 位保守残基的功能 | 第109-111页 |
| ·CgiA 催化腔+4 位氨基酸残基的功能 | 第111-113页 |
| 5 小结与讨论 | 第113-116页 |
| 第二章 Cellulophaga sp. QY3 中ι-卡拉胶酶 CgiB 的研究 | 第116-168页 |
| 第一节 Cellulophaga sp. QY3 中ι-卡拉胶酶 CgiB 的基因克隆 | 第116-142页 |
| 1 实验设计 | 第116页 |
| 2 仪器与材料 | 第116-118页 |
| ·实验仪器 | 第116-117页 |
| ·实验菌株及培养基 | 第117页 |
| ·实验试剂及材料 | 第117-118页 |
| 3 实验方法 | 第118-128页 |
| ·海洋细菌 Cellulophaga sp. QY3 进化树的构建 | 第118-119页 |
| ·GH82 家族ι-卡拉胶酶的多序列比对 | 第119页 |
| ·海洋细菌 Cellulophaga sp. QY3 基因组 DNA 的提取 | 第119-120页 |
| ·简并 PCR 克隆ι-卡拉胶酶 CgiB 的部分编码基因 | 第120-122页 |
| ·利用 Sitefinding PCR 克隆ι-卡拉胶酶 CgiB 全长编码基因 | 第122-127页 |
| ·ι-卡拉胶酶 CgiB 的基因及蛋白序列的生物信息学分析 | 第127-128页 |
| 4 实验结果 | 第128-141页 |
| ·海洋细菌 Cellulophaga sp. QY3 的系统进化树 | 第128-129页 |
| ·多糖水解酶 82 家族ι-卡拉胶酶的多序列比对结果 | 第129-130页 |
| ·简并 PCR 扩增ι-卡拉胶酶 CgiB 的编码基因 | 第130-132页 |
| ·Sitefinding PCR 扩增ι-卡拉胶酶 CgiB 的编码基因 | 第132-135页 |
| ·ι-卡拉胶酶 CgiB 序列拼接和比对分析 | 第135-141页 |
| 5 小结与讨论 | 第141-142页 |
| 第二节 ι-卡拉胶酶 CgiB 重组表达、分离纯化及酶学性质的研究128 | 第142-168页 |
| 1 实验设计 | 第143页 |
| 2 仪器与材料 | 第143-145页 |
| ·实验仪器 | 第143-144页 |
| ·实验菌株及培养基 | 第144页 |
| ·实验试剂及材料 | 第144-145页 |
| 3 实验方法 | 第145-153页 |
| ·重组载体质粒的构建 | 第145-148页 |
| ·重组ι-卡拉胶酶 CgiB 的表达和纯化 | 第148-150页 |
| ·重组ι-卡拉胶酶 CgiB 的酶学性质研究 | 第150-151页 |
| ·重组酶 CgiB 降解方式及降解产物的研究 | 第151-153页 |
| 4 实验结果 | 第153-165页 |
| ·重组表达载体的体系构建 | 第153-155页 |
| ·重组酶 CgiB 的表达和分离纯化 | 第155-157页 |
| ·重组酶 CgiB 的酶学性质研究 | 第157-160页 |
| ·重组酶 CgiB 降解方式及降解产物的研究 | 第160-165页 |
| 5 小结与讨论 | 第165-168页 |
| 参考文献 | 第168-181页 |
| 附录 | 第181-186页 |
| 附录 1 常用培养基的配制方法 | 第181页 |
| 附录 2 常用试剂、溶液的配制方法 | 第181-186页 |
| 个人简历及发表的学术论文 | 第186-187页 |
