| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-24页 |
| 1 橡胶树简介 | 第10-11页 |
| ·概述 | 第10页 |
| ·橡胶树育种面临的问题以及对策 | 第10-11页 |
| 2 FCA基因的研究现状 | 第11-13页 |
| ·FCA蛋白结构特点 | 第11-12页 |
| ·RRM结构特点及功能 | 第12页 |
| ·WW结构域的特点及功能 | 第12页 |
| ·厂基因调控植物开花机理 | 第12-13页 |
| 3 植物启动子研究进展 | 第13-19页 |
| ·植物启动子一般特征 | 第14-16页 |
| ·植物启动子的类型 | 第16-19页 |
| 4 酵母单杂交技术的原理及研究进展 | 第19-23页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-55页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·实验试材 | 第24-26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-55页 |
| ·转基因拟南芥的southern杂交 | 第27-31页 |
| ·转基因拟南芥的DNA提取 | 第27-28页 |
| ·拟南芥基因组的消化酶切 | 第28页 |
| ·DNA的印记转移(Southern blotting) | 第28-29页 |
| ·DNA的固定 | 第29页 |
| ·探针的制备 | 第29-30页 |
| ·杂交 | 第30-31页 |
| ·洗膜 | 第31页 |
| ·转基因拟南芥RT-PCR半定量检测 | 第31-34页 |
| ·拟南芥RNA的提取 | 第31页 |
| ·消化RNA里的DNA残留 | 第31-32页 |
| ·RNA质量检测 | 第32页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR actin循环数的确定 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR HbFCA循环数的确定 | 第34页 |
| ·转基因拟南芥表型观察 | 第34页 |
| ·HbFCA启动子在橡胶树中的表达分析 | 第34-38页 |
| ·表达载体pCAMBIA2300-HbFCA启动子：Gus-NOS的构建 | 第34-37页 |
| ·电击转化 | 第37页 |
| ·橡胶树次生体胚的培育 | 第37页 |
| ·浸染转化 | 第37-38页 |
| ·橡胶树HbFCA启动子Pfca组织表达分析 | 第38页 |
| ·橡胶树九个品种HbFCA基因启动子分析 | 第38-39页 |
| ·橡胶树Southern杂交检测体系优化 | 第39-41页 |
| ·橡胶树7-33-97基因组的酶切消化 | 第39-40页 |
| ·Hbfca探针的制备 | 第40页 |
| ·随机引物法和PCR法地高辛探针标记 | 第40-41页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第41页 |
| ·橡胶树杂交 | 第41页 |
| ·橡胶树八个品种Southern杂交检测 | 第41页 |
| ·胶树九个品种HbFCA基因生物信息学分析 | 第41页 |
| ·酵母单杂交试验 | 第41-55页 |
| ·HbFCA启动子的扩增 | 第41-44页 |
| ·Hbfca启动子Bait质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·Hbfca启动子Bait菌株的构建 | 第46-49页 |
| ·Bait菌株AbA本底浓度确定 | 第49页 |
| ·酵母单杂交cDNA文库的构建 | 第49-52页 |
| ·Bait菌株与cDNA文库质粒的大规模杂交 | 第52-53页 |
| ·酵母菌落PCR初步确定阳性克隆 | 第53-54页 |
| ·文库质粒的分离鉴定 | 第54页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第54页 |
| ·测序结果分析 | 第54-55页 |
| 结果与分析 | 第55-68页 |
| 1 转HbFCA基因拟南芥的检测及表型分析 | 第55-58页 |
| ·转基因拟南芥的southern检测 | 第55-56页 |
| ·转基因拟南芥的RT-PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转HbFCA基因拟南芥的表型观察 | 第57-58页 |
| 2 橡胶树HbFCA基因启动子在橡胶树中的表达分析 | 第58-60页 |
| ·pCAMBIA2300-HbFCA：Gus-NOS表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·橡胶树转化及GUS基因的组织表达 | 第59-60页 |
| 3 HbFCA启动子分析 | 第60-61页 |
| 4 橡胶树Southern杂交体系优化 | 第61-63页 |
| ·地高辛标记探针检测 | 第61-62页 |
| ·Southern杂交检测结果 | 第62-63页 |
| 5 橡胶树HbFCA基因Southern杂交及多态性分析 | 第63-65页 |
| ·橡胶树八个品种HbFCA基因Southern杂交 | 第63-64页 |
| ·HbFCA基因多态性分析 | 第64页 |
| ·分子进化树的构建 | 第64-65页 |
| 6 酵母单杂交 | 第65-68页 |
| ·Bait菌株的构建 | 第65-66页 |
| ·Bait菌株AbA本底浓度的确定 | 第66页 |
| ·酵母单杂交cDNA文库的构建及质量鉴定 | 第66-68页 |
| ·橡胶树叶片总RNA的提取 | 第66页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第66-67页 |
| ·酵母单杂交cDNA文库质量评价 | 第67-68页 |
| 讨论 | 第68-72页 |
| 1 关于HbFCA功能的初步探究 | 第68页 |
| 2 HbFCA启动子功能预测和在橡胶树中的表达分析 | 第68-69页 |
| 3 不同方法探针标记比较 | 第69-70页 |
| 4 橡胶树HbFCA基因多态性研究 | 第70页 |
| 5 均一化全长cDNA文库构建 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
