| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-48页 |
| 1. 微管、微管动态及微管切割蛋白 | 第15-21页 |
| ·微管 | 第15-17页 |
| ·微管的动态不稳定性 | 第17-19页 |
| ·微管切割蛋白 | 第19-21页 |
| 2. Katanin,katanin对微管切割机制及其调控 | 第21-25页 |
| ·Katanin概况 | 第21-22页 |
| ·katanin切割微管的机制 | 第22-24页 |
| ·微管切割的调控 | 第24-25页 |
| 3. Katanin p80的研究进展 | 第25-36页 |
| ·海胆 | 第25-26页 |
| ·线虫 | 第26-28页 |
| ·脊椎动物(人、小鼠) | 第28-34页 |
| ·生化功能 | 第28-30页 |
| ·生物学功能 | 第30-34页 |
| ·锥虫 | 第34-35页 |
| ·衣滴虫 | 第35-36页 |
| ·四膜虫 | 第36页 |
| ·高等植物 | 第36页 |
| 4. 植物中katanin的研究进展 | 第36-44页 |
| ·katanin突变体的发现及在细胞延伸中的作用机制模型 | 第37-40页 |
| ·fra2 | 第37页 |
| ·bot1 | 第37页 |
| ·erh3 | 第37页 |
| ·lue1 | 第37-38页 |
| ·dgl7 | 第38页 |
| ·katanin在细胞延伸中的作用机制模型 | 第38-40页 |
| ·katanin参与细胞分裂 | 第40-41页 |
| ·katanin的调控 | 第41-44页 |
| ·katanin的信号调控 | 第41-42页 |
| ·katanin的翻译后调控 | 第42-44页 |
| 5. 微管与植物细胞的生长和细胞分裂 | 第44-47页 |
| ·微管与植物细胞的生长 | 第44-45页 |
| ·微管与植物细胞的有丝分裂 | 第45-47页 |
| 6. 本研究的目的和意义 | 第47-48页 |
| 第二章 材料与方法 | 第48-82页 |
| 1. 实验材料 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-82页 |
| ·简单的生物信息学方法 | 第48-49页 |
| ·质粒提取和载体构建 | 第49-58页 |
| ·质粒的提取 | 第49-50页 |
| ·载体构建 | 第50-58页 |
| ·RT-PCR(RNA的提取,反转,PCR) | 第50-53页 |
| ·构建克隆载体 | 第53-55页 |
| ·构建各种用途的载体 | 第55-58页 |
| ·筛选细菌双杂交文库及酵母双杂交验证 | 第58-64页 |
| ·筛选细菌双杂交文库 | 第58-62页 |
| ·pBT-p60载体构建及表达验证 | 第58-59页 |
| ·pBT-p60的自激活检测 | 第59-60页 |
| ·制备转化有pBT-p60的190感受态 | 第60页 |
| ·文库的筛选及阳性克隆的验证 | 第60-61页 |
| ·序列比对 | 第61-62页 |
| ·酵母双杂交验证 | 第62-64页 |
| ·培养基和主要试剂 | 第62-63页 |
| ·酵母AH109感受态细胞的制备(LiAc法) | 第63页 |
| ·酵母双杂交载体的共转化(42℃热激法) | 第63-64页 |
| ·共转化阳性克隆的进一步验证 | 第64页 |
| ·农杆菌介导的水稻中花11的遗传转化 | 第64-66页 |
| ·本实验所用的培养基及配方 | 第64页 |
| ·农杆菌生长的培养基及其配方 | 第64页 |
| ·植物组织培养的培养基及其配方 | 第64页 |
| ·转化方法 | 第64-66页 |
| ·愈伤组织诱导 | 第64-65页 |
| ·愈伤组织继代 | 第65页 |
| ·预培养 | 第65页 |
| ·农杆菌侵染愈伤组织 | 第65页 |
| ·洗涤和筛选 | 第65页 |
| ·分化 | 第65-66页 |
| ·生根 | 第66页 |
| ·移栽 | 第66页 |
| ·转基因植株的检测 | 第66-70页 |
| ·水稻叶片基因组DNA的提取 | 第66-67页 |
| ·普通PCR | 第67页 |
| ·TAIL-PCR | 第67-69页 |
| ·Real time quantitative RT-PCR | 第69-70页 |
| ·半定量PCR | 第70页 |
| ·SDS-PAGE及Western blot分析 | 第70-72页 |
| ·水稻叶片总蛋白的提取 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE | 第70-72页 |
| ·Western blot分析 | 第72页 |
| ·PI染色,DAPI染色及共聚焦显微镜 | 第72-73页 |
| ·PI染色及共聚焦显微镜 | 第72-73页 |
| ·DAPI染色及共聚焦显微镜 | 第73页 |
| ·颖壳表面的扫面电镜观察 | 第73页 |
| ·根尖伸长区皮层微管的免疫染色 | 第73-75页 |
| ·oryzalin的处理 | 第75-76页 |
| ·有丝分裂的观察 | 第76-79页 |
| ·常用的培养基及试剂的配制 | 第79-82页 |
| 第三章 结果与分析 | 第82-125页 |
| 1. 用KTN60做诱饵淘洗细菌双杂交文库 | 第82-84页 |
| 2. KTN80s的一级结构及进化分析 | 第84-88页 |
| ·KTN80s和KTN60的一级结构 | 第85-86页 |
| ·KTN80s的进化分析 | 第86-88页 |
| 3. 酵母双杂交验证KTN80s和KTN60的相互作用 | 第88-93页 |
| ·载体的构建 | 第89-90页 |
| ·酵母双杂交验证 | 第90-93页 |
| 4. KTN80s的发育时期及组织表达水平分析 | 第93-97页 |
| 5. KTN80a的转基因、分子鉴定及植株表型分析 | 第97-106页 |
| ·OsKTN80a的转基因 | 第97-99页 |
| ·OsKTN80a的过表达材料的分子鉴定 | 第99-102页 |
| ·DNA水平的鉴定 | 第99-100页 |
| ·RNA水平的鉴定 | 第100-102页 |
| ·蛋白水平的鉴定 | 第102页 |
| ·OsKTN80a的过表达材料的植株水平的表型分析 | 第102-106页 |
| 6. 分析及小结1 | 第106页 |
| 7. OsKTN80a过表达影响了水稻根细胞的延长和颖壳表层细胞的排列 | 第106-109页 |
| 8. 伸长区细胞皮层微管的横向排列在KTN80a过表达植株中受到破坏 | 第109-111页 |
| 9. 转基因材料根尖生长对oryzalin处理的抗性分析 | 第111-113页 |
| 10. KTN80a过表达材料的根尖皮层微管更加耐受oryzalin的处理 | 第113-114页 |
| 11. 分析及小结2 | 第114-115页 |
| 12. 过表达KTN80a导致细胞分裂滞留于有丝分裂的cytokinesis时期 | 第115-119页 |
| 13. KTN80a过表达导致核间距变小,成膜体的长度增加 | 第119-120页 |
| 14. 转基因导致畸形的cytokinesis频发 | 第120-123页 |
| 15. 分析及小结3 | 第123-124页 |
| 16. 总结 | 第124-125页 |
| 第四章 讨论 | 第125-136页 |
| 1. 为什么只影响了幼苗期根的生长 | 第125页 |
| 2. KTN80a可能通过抑制KTN60的活性促进微管更稳定 | 第125-127页 |
| 3. KTN80a影响细胞延伸的机制的探讨 | 第127-130页 |
| 4. KTN80a影响细胞分裂的机制的探讨 | 第130-135页 |
| ·KTN80a过表达后滞留于cytokinesis时期 | 第130-132页 |
| ·对遗传物质分离的影响 | 第132-133页 |
| ·对成膜体形态和功能的影响 | 第133-135页 |
| 5. 前景与展望 | 第135-136页 |
| 第五章 参考文献 | 第136-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
