青虾泛素特异性蛋白酶9基因（Usp9）全长cDNA克隆及时空表达分析
| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一节 甲壳动物性别决定和性别分化研究 | 第12-18页 |
| 1 动物性别决定和性别分化概述 | 第12-14页 |
| ·遗传性别决定型(GSD) | 第12-13页 |
| ·XY型和XO型 | 第12-13页 |
| ·ZW型和ZO型 | 第13页 |
| ·单二倍体性别决定 | 第13页 |
| ·环境性别决定型(ESD) | 第13-14页 |
| 2 甲壳动物性别决定和性别分化研究 | 第14-18页 |
| ·甲壳动物性染色体的研究 | 第14-15页 |
| ·影响甲壳动物性别决定和性别分化的因素 | 第15-18页 |
| ·促雄腺对甲壳动物性别决定和性别分化的影响 | 第15-17页 |
| ·环境因素对甲壳动物性别决定和性别分化的影响 | 第17-18页 |
| 第二节 泛素及其相关基因研究 | 第18-24页 |
| 1 泛素研究进展 | 第18-23页 |
| ·泛素结构和泛素化 | 第18-20页 |
| ·去泛素化研究进展 | 第20-22页 |
| ·泛素生殖相关功能研究 | 第22-23页 |
| 2 泛素相关基因的研究进展 | 第23-24页 |
| ·甲壳动物泛素相关基因概况 | 第23页 |
| ·Usp9基因的研究 | 第23-24页 |
| 第三节 本研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 第二章 青虾Usp9基因的克隆及表达分析 | 第26-54页 |
| 1 材料和方法 | 第26-27页 |
| ·实验虾 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-39页 |
| ·青虾总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·实验用品的预处理 | 第27页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·总RNA检测 | 第28页 |
| ·青虾Usp9基因中间片段的获得 | 第28-30页 |
| ·基因筛查 | 第28-29页 |
| ·验证中间片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·青虾Usp9的3’RACE | 第30-32页 |
| ·引物的设计 | 第30页 |
| ·反转录 | 第30-31页 |
| ·3’端扩增 | 第31-32页 |
| ·青虾Usp9的5’RACE | 第32-36页 |
| ·引物的设计 | 第32页 |
| ·反转录 | 第32-34页 |
| ·5’端扩增 | 第34-36页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第36-38页 |
| ·感受态的制备 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36-37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·转化 | 第37页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第38页 |
| ·序列的测定及分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-52页 |
| ·青虾Usp9基因中间片段序列的获得 | 第39页 |
| ·青虾Usp9基因3’端序列 | 第39页 |
| ·青虾Usp9基因5’端序列 | 第39页 |
| ·青虾Usp9基因全长cDNA序列结构特征 | 第39-42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42-46页 |
| ·理化性质分析 | 第42页 |
| ·信号肽预测 | 第42-43页 |
| ·跨膜区预测 | 第43-44页 |
| ·疏水性分析 | 第44-45页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第45页 |
| ·二级结构预测 | 第45-46页 |
| ·功能位点分析结果 | 第46页 |
| ·同源性分析 | 第46-50页 |
| ·系统发育分析 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 青虾Usp9基因的时空表达分析 | 第54-66页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验虾 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-60页 |
| ·青虾胚胎发育采样时期 | 第55-58页 |
| ·青虾Usp9基因时空表达的荧光定量PCR分析 | 第58-60页 |
| ·引物设计及检验 | 第58页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR反应 | 第59-60页 |
| ·Real-time荧光定量PCR分析 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| ·青虾各样本总RNA的检测 | 第60页 |
| ·荧光定量引物的验证 | 第60-61页 |
| ·青虾Usp9基因在不同发育时期的表达 | 第61-62页 |
| ·青虾Usp9基因在成体不同组织中的表达 | 第62页 |
| ·青虾Usp9基因在雌雄组织中的表达差异研究 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·成体不同组织的表达差异 | 第63页 |
| ·胚胎不同时期的发育表达差异 | 第63-64页 |
| ·雌雄组织的表达差异 | 第64-66页 |
| 全文结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 实验试剂及配置 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 已发表或已接受的论文 | 第80页 |
