| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 CSFV分子生物学特性 | 第13-15页 |
| 2 CSFV感染宿主细胞的途径和机制 | 第15-17页 |
| 3 CSFV感染免疫抑制机理 | 第17-20页 |
| 4 CSFV感染致组织病变及机理 | 第20-22页 |
| 5 CSFV在感染细胞中复制增殖机制 | 第22-24页 |
| 6 结构蛋白在CSFV感染中的作用 | 第24-25页 |
| 7 非结构蛋白在CSFV感染细胞中的作用 | 第25-28页 |
| 8 展望及本研究目的 | 第28-30页 |
| 第二章 CSFV蛋白在感染细胞中表达情况的研究 | 第30-42页 |
| 1 材料与方法 | 第30-34页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·质粒、菌株、细胞和实验动物 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·CSFV蛋白原核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·CSFV蛋白原核表达与鉴定 | 第32页 |
| ·蛋白纯化 | 第32页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第32-33页 |
| ·Western blotting检测CSFV感染细胞中病毒蛋白 | 第33页 |
| ·IFA鉴定CSFV感染细胞中病毒蛋白 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-37页 |
| ·CSFV蛋白原核表达载体的构建 | 第34页 |
| ·CSFV蛋白原核表达、鉴定及纯化 | 第34页 |
| ·ELISA检测CSFV蛋白免疫小鼠血清抗体 | 第34-35页 |
| ·Western blotting检测CSFV感染细胞中病毒蛋白 | 第35-36页 |
| ·IFA鉴定CSFV感染细胞中病毒蛋白 | 第36-37页 |
| 3 分析与讨论 | 第37-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 CSFV蛋白真核表达研究及稳定表达细胞系的建立 | 第42-61页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·质粒、大肠杆菌感受态细胞、病毒和ST细胞 | 第42页 |
| ·引物设计与合成 | 第42-43页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·CSFV蛋白真核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第44页 |
| ·转染细胞检测 | 第44-45页 |
| ·细胞克隆及稳定表达细胞系建立 | 第45页 |
| ·细胞系稳定性及细胞增殖情况测定 | 第45-46页 |
| ·细胞周期测定 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-55页 |
| ·CSFV蛋白真核表达载体的构建 | 第46页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第46页 |
| ·转染细胞中目的蛋白基因检测 | 第46-47页 |
| ·转染细胞中荧光观察 | 第47-49页 |
| ·荧光信号强弱 | 第47-48页 |
| ·荧光信号分布 | 第48-49页 |
| ·细胞克隆及稳定表达细胞系的鉴定 | 第49-52页 |
| ·细胞系稳定性及增殖情况测定 | 第52-54页 |
| ·细胞周期测定 | 第54-55页 |
| 3 分析与讨论 | 第55-59页 |
| 4 小结 | 第59-61页 |
| 第四章 各CSFV蛋白真核表达后对病毒感染影响的研究 | 第61-78页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·细胞和病毒 | 第62页 |
| ·引物设计与合成 | 第62页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-63页 |
| ·RNA提取及反转录合成cDNA | 第62-63页 |
| ·pMD-Actin质粒构建 | 第63页 |
| ·检测CSFV实时荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第63页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测CSFV蛋白细胞系中病毒滴度 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-72页 |
| ·质粒的构建和提取 | 第64页 |
| ·检测CSFV荧光实时定量RT-PCR方法建立 | 第64-67页 |
| ·检测CSFV基因和β-Actin基因的竞争曲线 | 第64-65页 |
| ·直线回归方程的建立 | 第65-67页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测CSFV蛋白细胞系中病毒滴度 | 第67-72页 |
| 3讨论分析 | 第72-77页 |
| 4 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 EO分泌及其在CSFV释放中的作用研究 | 第78-90页 |
| 1 材料与方法 | 第78-80页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·细胞和病毒 | 第79页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-80页 |
| ·转染细胞中荧光蛋白定位分析 | 第79页 |
| ·荧光显微镜检测细胞培养基中融合蛋白 | 第79页 |
| ·Western blotting检测细胞培养基中融合蛋白 | 第79页 |
| ·CSFV感染蛋白细胞系中病毒滴度的检测 | 第79页 |
| ·CSFV感染细胞培养基中病毒分布情况 | 第79-80页 |
| 2 结果 | 第80-86页 |
| ·转染细胞荧光蛋白定位分析 | 第80-81页 |
| ·荧光显微镜检测细胞培养基中融合蛋白 | 第81-82页 |
| ·Western blotting检测细胞培养基中融合蛋白 | 第82-83页 |
| ·CSFV感染蛋白细胞系中病毒滴度的检测 | 第83页 |
| ·CSFV感染细胞培养基中病毒粒子分析 | 第83-86页 |
| 3 讨论分析 | 第86-88页 |
| 4 小结 | 第88-90页 |
| 全文总结及论文创新之处 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-110页 |
| 附录 | 第110-112页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 个人简历 | 第114-115页 |
