| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-35页 |
| ·MiRNA的概念及特点 | 第14-16页 |
| ·MiRNA的概念 | 第14页 |
| ·MiRNA的发现 | 第14页 |
| ·MiRNA的特点和与siRNA的比较 | 第14-16页 |
| ·MiRNA的特点 | 第15页 |
| ·MiRNA与siRNA的比较 | 第15-16页 |
| ·MiRNA在基因组上的分布 | 第16-17页 |
| ·MiRNA的起源与进化 | 第17-22页 |
| ·MiRNA的物种分布与保守性 | 第17页 |
| ·MiRNA的起源与进化 | 第17-19页 |
| ·MiRNA家族 | 第19-22页 |
| ·MiRNA的生物合成与加工 | 第22-26页 |
| ·MiRNA的生物合成与加工 | 第22-23页 |
| ·动植物miRNA生物合成与加工成熟过程的比较 | 第23页 |
| ·MiRNA 加工与成熟过程中需要的酶及功能蛋白质 | 第23-26页 |
| ·Drosha酶 | 第23-25页 |
| ·Dicer酶 | 第25页 |
| ·其他辅助蛋白质 | 第25-26页 |
| ·Agonaute蛋白家族 | 第26页 |
| ·MiRNA的作用方式 | 第26-28页 |
| ·MiRNA参与转录后水平的基因调控 | 第26-27页 |
| ·MiRNA参与转录水平的基因调控 | 第27-28页 |
| ·MiRNA的其他作用方式 | 第28页 |
| ·MiRNA的生物学功能 | 第28-31页 |
| ·MiRNA在植物生长发育中的作用 | 第28-30页 |
| ·MiRNA在植物响应胁迫过程中的作用 | 第30-31页 |
| ·MiRNA的研究方法 | 第31-34页 |
| ·MiRNA的分离与克隆 | 第31-32页 |
| ·常用的分析miRNA的数据库和软件 | 第32页 |
| ·MiRNA靶基因的预测 | 第32-33页 |
| ·MiRNA表达量的检测方法 | 第33-34页 |
| ·本项研究的目的意义 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-52页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-52页 |
| ·植物基因组的提取与纯化 | 第36-37页 |
| ·植物基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·植物基因组的纯化 | 第37页 |
| ·载体构建 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·酶切和回收 | 第38页 |
| ·超表达miR171b，mi396b和miR400 表达载体的构建 | 第38页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第38页 |
| ·PCR鉴定突变体纯合植株 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·大量法提质粒 | 第40页 |
| ·小量碱法提质粒 | 第40-41页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·冻融法转化农杆菌细胞 | 第41页 |
| ·拟南芥的转化及转基因拟南芥的鉴定 | 第41-42页 |
| ·拟南芥的转化 | 第41-42页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第42页 |
| ·RNA的提取纯化与反转录 | 第42-43页 |
| ·TRIZOL法提取RNA | 第42页 |
| ·RNA的纯化 | 第42页 |
| ·RNA中基因组DNA的去除 | 第42-43页 |
| ·RNA的反转录 | 第43页 |
| ·实时定量PCR | 第43-44页 |
| ·GUS活性测定 | 第44-45页 |
| ·报告基因LUC的表达量测定 | 第45页 |
| ·植物miRNA的提取 | 第45-47页 |
| ·用qRT-PCR检测成熟体miRNA的表达量 | 第47-48页 |
| ·MiRNA 3′端进行加Poly（A）处理及反转录 | 第47-48页 |
| ·MiRNA的荧光定量检测 | 第48页 |
| ·瞬时转化拟南芥原生质体的方法 | 第48-50页 |
| ·RNAhybrid的使用方法 | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-61页 |
| ·生物信息学方法预测可能靶向基因启动子区域的miRNA | 第52页 |
| ·瞬时转化拟南芥原生质体验证miRNA对靶基因的调控作用 | 第52-54页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·超表达miRNA后对靶基因表达量的检测 | 第53-54页 |
| ·转基因植株中靶基因表达水平的检测 | 第54-57页 |
| ·植物表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·转基因植株表达量的检测 | 第55页 |
| ·靶基因表达水平的检测 | 第55-57页 |
| ·MiRNA对靶基因的调控方式分析 | 第57-59页 |
| ·靶基因启动子区域表观遗传学修饰的预测 | 第57-58页 |
| ·几种RdDM途径关键基因突变体中靶基因表达量的检测 | 第58-59页 |
| ·MiRNA171b和miRNA396b响应多种非生物胁迫 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73页 |
