| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 DHAV概述 | 第9-11页 |
| ·DHAV的流行现状 | 第9页 |
| ·DHAV-1的分类地位 | 第9页 |
| ·DHAV的病原学特性 | 第9-10页 |
| ·DHAV的纯化 | 第10-11页 |
| ·DHAV病原检测 | 第11页 |
| 2 类病毒颗粒的研究概述 | 第11-15页 |
| ·小RNA病毒VLP组装研究 | 第12-13页 |
| ·VLP的应用 | 第13-15页 |
| 3 杆状病毒表达系统 | 第15-18页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 重组杆状病毒vBac-P1-3CD的获得及DHAV-1病毒样颗粒的表达 | 第19-43页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| ·毒株、菌株、质粒及细胞 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-32页 |
| ·P1、3CD基因的引物设计与合成 | 第20-21页 |
| ·P1和3CD基因的克隆 | 第21-25页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第21页 |
| ·RT-PCR扩增及检测 | 第21页 |
| ·RT-PCR产物回收与纯化 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第22-23页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·序列比对 | 第25页 |
| ·构建供体质粒pFastBac Dual-P1-3CD | 第25-28页 |
| ·P1基因和pFastBac Dual质粒双酶切 | 第25页 |
| ·P1与pFastBac Dual质粒的酶切产物的连接、转化及鉴定 | 第25-26页 |
| ·3CD基因和pFastBac Dual-P1质粒双酶切 | 第26-27页 |
| ·3CD基因与pFastBac Dual-P1质粒的酶切产物的连接、转化及鉴定 | 第27-28页 |
| ·构建穿梭质粒Bacmid-P1-3CD | 第28-29页 |
| ·制备DH10感受态细胞 | 第28页 |
| ·pFastBac Dual-P1-3CD质粒转化DH10感受态细胞 | 第28页 |
| ·重组杆状质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·重组杆状质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·重组杆状病毒vBac-P1-3CD的获得 | 第29-30页 |
| ·重组杆状质粒转染昆虫细胞Sf-9 | 第29-30页 |
| ·感染Sf-9细胞收获重组杆状病毒 | 第30页 |
| ·DHAV-1类病毒颗粒的鉴定 | 第30-32页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第30-31页 |
| ·病毒感染Sf-9细胞 | 第31页 |
| ·电镜观察细胞内类病毒颗粒 | 第31页 |
| ·Western blot检测目的基因 | 第31-32页 |
| ·类病毒颗粒的初步纯化 | 第32页 |
| ·类病毒颗粒负染电镜观察 | 第32页 |
| 3 试验结果 | 第32-39页 |
| ·P1、3CD基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·pFastBac Dual-P1-3CD质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·穿梭质粒Bacmid-P1-3CD的构建 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第35页 |
| ·感染细胞的超薄切片观察 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第36-38页 |
| ·DHAV-1 VLP的纯化及观察 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第39-40页 |
| ·VLP的形成及特性分析 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
