| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| ·蛋白酶的概述及分类 | 第11页 |
| ·碱性蛋白酶蛋白酶 | 第11-18页 |
| ·碱性蛋白酶蛋白酶的来源 | 第11-12页 |
| ·碱性蛋白质结构特点及活性中心 | 第12-14页 |
| ·碱性蛋白酶的空间结构和反应机理 | 第14-15页 |
| ·碱性蛋白酶的性质 | 第15-18页 |
| ·碱性蛋白酶的应用 | 第18-20页 |
| ·碱性蛋白酶的分子改造研究概况 | 第20-21页 |
| ·酶的分子改造 | 第20页 |
| ·酶分子改造策略 | 第20-21页 |
| ·碱性蛋白酶的分子改造 | 第21页 |
| ·研究背景和意义 | 第21-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·土样的采集 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·主要酶和试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-35页 |
| ·产碱性蛋白酶菌株的筛选 | 第25页 |
| ·筛选菌株总DNA的提取及制备 | 第25页 |
| ·菌株的16SrDNA鉴定 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第26页 |
| ·DNA连接产物的转化 | 第26页 |
| ·碱性蛋白酶的基因克隆 | 第26-30页 |
| ·重组质粒的验证 | 第30页 |
| ·蛋白酶的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·蛋白酶的纯化 | 第31页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第31-32页 |
| ·酪氨酸标准曲线的绘制 | 第32-33页 |
| ·蛋白酶酶活力的测定 | 第33-34页 |
| ·碱性蛋白酶酶学性质的研究 | 第34页 |
| ·碱性蛋白酶BL1、BL2的分子改造 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-63页 |
| ·产碱性蛋白酶菌株的筛选 | 第35页 |
| ·GXT-1总DNA的制备 | 第35-36页 |
| ·GXT-1菌株16S RDNA的鉴定 | 第36-37页 |
| ·碱性蛋白酶BL1的克隆表达及酶学性质 | 第37-47页 |
| ·碱性蛋白酶BL1的信号肽预测 | 第37-38页 |
| ·碱性蛋白酶基因bl1的克隆 | 第38-39页 |
| ·pET22b(+)-bl1重组质粒的构建 | 第39页 |
| ·pET22b(+)-bl1重组质粒的验证 | 第39-41页 |
| ·碱性蛋白酶BL1的表达及纯化 | 第41页 |
| ·碱性蛋白酶BL1的酶学性质 | 第41-47页 |
| ·碱性蛋白酶BL2的克隆表达及酶学性质 | 第47-57页 |
| ·碱性蛋白酶BL2的信号肽预测 | 第47-49页 |
| ·碱性蛋白酶bl2基因的克隆 | 第49页 |
| ·pET22b(+)-bl2重组质粒的构建 | 第49页 |
| ·pET22b(+)-bl2重组质粒的验证 | 第49-51页 |
| ·BL2碱性蛋白酶的表达及纯化 | 第51页 |
| ·碱性蛋白酶BL2的酶学性质 | 第51-57页 |
| ·碱性蛋白酶基因BL1、BL2的分子改造 | 第57-63页 |
| ·碱性蛋白酶BL1同源建模及突变点的选择 | 第57-58页 |
| ·bl1反向PCR | 第58-59页 |
| ·BL2突变酶的纯化及SDS-PAGE分析 | 第59-60页 |
| ·BL1野生型和突变型酶的比活力测定 | 第60页 |
| ·碱性蛋白酶BL2同源建模及突变点的选择 | 第60-61页 |
| ·bl2反向PCR | 第61页 |
| ·BL2突变酶的纯化及SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| ·BL2野生型和突变型酶的比活力测定 | 第62-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-65页 |
| ·产碱性蛋白酶菌株BACILLUS LICHENIFORMIS GXT-1的筛选鉴定 | 第63页 |
| ·BACILLUS LICHENIFORMIS GXT-1碱性蛋白酶的克隆表达和酶学性质 | 第63-64页 |
| ·碱性蛋白酶的分子改造 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·问题与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录1 | 第77-79页 |
| 附录2 | 第79-82页 |
| 附录3 | 第82-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第86页 |