| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-17页 |
| ·促凋亡蛋白 PUMA 磷酸化位点的发现 | 第14页 |
| ·PUMA 促细胞凋亡的分子机制探讨 | 第14-17页 |
| 第2章 突变型 PUMA 质粒的构建及表达 | 第17-36页 |
| ·材料与方法 | 第17-28页 |
| ·细胞株与质粒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18-20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·统计学处理 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-34页 |
| ·目的基因 PUMA 扩增产物的鉴定 | 第28页 |
| ·pIRES2-EGFP-(HA)2-PUMA 重组质粒测序鉴定及 BLAST | 第28-30页 |
| ·pIRES2-EGFP-(HA)2-PUMA-T28G 突变序列扩增结果 | 第30页 |
| ·野生型、突变型 pIRES2-EGFP-(HA)2-PUMA 质粒 PCR 及测序结果 | 第30-31页 |
| ·野生型、突变型 PUMA RT-PCR 结果 | 第31-32页 |
| ·野生型和突变型 PIRES2-EGFP-(HA)2-PUMA 的表达 | 第32-34页 |
| ·突变型 PUMA Western blot 结果 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 突变型 PUMA 对 Hela 细胞生物学功能的影响 | 第36-52页 |
| ·材料与方法 | 第36-41页 |
| ·细胞与质粒 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·统计处理 | 第39-41页 |
| ·结果 | 第41-50页 |
| ·PCR 检测突变型 PUMA 质粒与野生型 PUMA 质粒的转染、转录效率 | 第41-43页 |
| ·Western blot 检测突变型与野生型 PUMA 蛋白表达情况 | 第43-45页 |
| ·Western blot 检测突变型与野生型 PUMA 蛋白降解情况 | 第45-46页 |
| ·MTT 检测 Hela 细胞存活率 | 第46-47页 |
| ·核染色法检测突变型 PUMA 促 Hela 细胞凋亡 | 第47-49页 |
| ·流式细胞术检测 PUMA 过表达诱导 Hela 细胞凋亡 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第4章 PUMA 对 Hela 细胞促凋亡的分子机制研究 | 第52-60页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·细胞与质粒 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·统计处理 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-56页 |
| ·总 RNA 提取样品的质量与纯度 | 第54页 |
| ·PUMA 转染细胞后 BCL-2 和 BAX mRNA 表达的变化 | 第54-55页 |
| ·分光光度计检测 Hela 细胞 Caspase-3 的活性变化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 全文总结与下一步工作计划 | 第60-61页 |
| ·全文总结 | 第60页 |
| ·下一步工作计划 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附图 | 第65-68页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第68-69页 |
| 综述 | 第69-78页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
