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三种生物的GABA受体基因亚克隆与表达的初步研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-9页
第一章 文献综述第9-29页
   ·GABA 及其受体的概述第9-13页
     ·哺乳动物 GABA 受体第9-12页
     ·昆虫 GABA 受体第12-13页
   ·果蝇 GABA 受体亚基的分子生物学第13-18页
     ·Rdl 编码的亚基与昆虫 GABA 受体的特征药理学第14-15页
     ·Rdl 基因的可变剪接第15页
     ·RDL 作为天然昆虫 GABA 受体的模型第15-18页
   ·GABAA 受体相关农药研究进展第18页
   ·不同的表达体系第18-27页
     ·原核体系第19-22页
     ·酵母表达系统第22-24页
     ·昆虫细胞表达系统第24-25页
     ·哺乳动物细胞表达系统第25-26页
     ·总结第26-27页
   ·本论文研究内容目的及意义第27-29页
     ·本论文的研究目的及意义第27页
     ·研究内容第27-29页
第二章 果蝇 GABA 受体 RDL 全长,截去部分胞外区的表达及鉴定第29-65页
   ·实验材料及设备第29-32页
     ·质粒和菌株第29-30页
       ·工具酶及主要的试剂第30-31页
     ·其他试剂及配制第31-32页
     ·实验仪器及设备第32页
   ·载体构建示意图第32-34页
   ·实验方法第34-42页
     ·DH5 感受态的制备第34页
     ·质粒的小量抽提第34-35页
     ·重组质粒的双酶切鉴定第35-36页
     ·重组质粒的测序鉴定第36页
     ·BL21(DE3)感受态的制备第36页
     ·转化第36页
     ·单酶切第36页
     ·重组蛋白的诱导表达第36-37页
     ·SDS-PAGE 鉴定第37-38页
     ·目的蛋白的获得(收集包涵体和上清)第38页
     ·镍柱纯化蛋白(上清和沉淀)第38-39页
     ·分离的蛋白的鉴定(SDS-PAGE 胶)第39页
     ·镍柱的复性第39-40页
     ·蛋白的纯化(去盐)第40页
     ·western blot 鉴定第40-41页
     ·Brandford 法测定重组蛋白浓度第41-42页
   ·结果与讨论第42-61页
     ·RDL 合成序列及测序第42-51页
     ·抽质粒及其单,双酶切鉴定第51页
     ·全长重组质粒的测序结果第51-54页
     ·全长重组质粒的单,双酶切鉴定第54-55页
     ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第55-56页
     ·重组蛋白最佳诱导时间的确定第56-58页
     ·重组蛋白表达方式的判定第58页
     ·果蝇 RDL 全长蛋白的纯化第58-59页
     ·western blot 鉴定第59-60页
     ·蛋白浓度的测定第60-61页
   ·讨论第61-65页
第三章 鳙鱼的 GABA 受体及二化螟的亚克隆第65-85页
   ·鳙鱼的亚克隆第65-70页
     ·实验材料第65-66页
     ·实验方法第66-70页
   ·二化螟的亚克隆第70-77页
     ·实验材料第70-71页
     ·实验方法第71-77页
   ·结果与分析第77-82页
     ·鳙鱼总 RNA 抽提的结果第77-78页
     ·鳙鱼 GABAA 受体 3 的 RT—PCR 结果第78页
     ·二化螟总 RNA 抽提的结果第78-79页
     ·二化螟 RDL 亚基的 RT-PCR 结果第79页
     ·抽质粒及双酶切结果第79-80页
     ·测序结果第80-82页
   ·讨论第82-85页
第四章 工作总结及展望第85-86页
   ·总结第85页
   ·工作展望第85-86页
致谢第86-87页
参考文献第87-97页
作者简介第97页

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