| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1 生物钟的概念 | 第13-14页 |
| 2 生物节律 | 第14-15页 |
| ·生物节律的基本概念 | 第14页 |
| ·生物节律产生机制的假说 | 第14-15页 |
| 3 生物节律相关基因 | 第15-21页 |
| ·隐花色素基因 | 第16-17页 |
| ·周期蛋白基因 | 第17-18页 |
| ·永恒蛋白基因和逾时蛋白基因 | 第18-19页 |
| ·时钟蛋白基因 | 第19页 |
| ·周期循环蛋白基因 | 第19-20页 |
| ·旋转蛋白基因 | 第20页 |
| ·Pdp 基因 | 第20页 |
| ·双时蛋白基因 | 第20-21页 |
| 4 昼夜节律生物钟的分子机制 | 第21-29页 |
| ·哺乳动物生物钟分子机制 | 第21-23页 |
| ·昆虫生物钟分子机制 | 第23-29页 |
| 5 家蚕生物钟研究进展及现状 | 第29-31页 |
| ·家蚕生物钟基因 | 第29-30页 |
| ·家蚕生物钟主要研究方向 | 第30-31页 |
| 6 细胞中生物钟研究进展 | 第31-32页 |
| 7 生物钟研究的前景 | 第32-34页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第34-36页 |
| 1 研究背景 | 第34页 |
| 2 研究目的与意义 | 第34页 |
| 3 研究内容 | 第34-35页 |
| ·光照和温度瞬时刺激对家蚕 BmN 细胞主要生物钟基因表达的影响 | 第34-35页 |
| ·光照和温度节律对家蚕 BmN 细胞主要生物钟基因表达振荡周期的影响 | 第35页 |
| ·干涉 Cry1 或 Per 基因表达调查其他生物钟核心钟基因的表达变化 | 第35页 |
| 4 研究技术路线 | 第35-36页 |
| 第三章 主要试剂与常用实验方法 | 第36-48页 |
| 1 常用材料与试剂 | 第36-39页 |
| 2 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 3 常用实验方法 | 第40-48页 |
| ·细胞传代培养的基本操作 | 第40-41页 |
| ·siRNA 转染方法（以 24 孔板为例） | 第41-42页 |
| ·细胞总 RNA 的抽提 | 第42-43页 |
| ·基因组 DNA 消化 | 第43页 |
| ·RNA 反转录 | 第43-44页 |
| ·实时定量 PCR（Real time PCR） | 第44页 |
| ·Western-Blot 操作流程 | 第44-47页 |
| ·免疫荧光检测 | 第47-48页 |
| 第四章 光照和高温对家蚕 BmN 细胞系生物钟基因表达的影响 | 第48-53页 |
| 1 材料与方法 | 第48-49页 |
| ·供试细胞系为家蚕 BmN 细胞系 | 第48页 |
| ·细胞总 RNA 提取及 cDNA 第一条链的合成 | 第48页 |
| ·基因表达谱分析 | 第48-49页 |
| ·数据处理方法 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-51页 |
| ·光照刺激对家蚕 BmN 细胞主要生物钟基因表达的影响 | 第49-50页 |
| ·30℃刺激对家蚕 BmN 细胞主要生物钟基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.讨论与小结 | 第51-53页 |
| ·家蚕 BmN 细胞对光照和温度授时是有响应的 | 第51-52页 |
| ·Cry1 可能是家蚕 BmN 细胞的主要光信号受体 | 第52页 |
| ·BmN 细胞中的温度信号受体有待进一步确认 | 第52-53页 |
| 第五章 光照和温度节律对家蚕 BmN 细胞节律基因表达的影响 | 第53-70页 |
| 第一节 光节律对家蚕 BmN 细胞中生物钟基因表达的影响 | 第53-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| ·供试细胞系为家蚕 BmN 细胞系 | 第53-54页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 第 1 条链的合成 | 第54页 |
| ·细胞总蛋白提取方法 | 第54页 |
| ·基因表达谱分析 | 第54页 |
| ·基因表达数据处理方法 | 第54-55页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第55页 |
| ·western blotting 的操作方法 | 第55页 |
| ·免疫荧光操作方法 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-64页 |
| ·不同光照节律下 Cry1 基因和蛋白质的表达变化 | 第55-57页 |
| ·Cry2 在不同光照节律下的表达变化 | 第57-58页 |
| ·Per 在不同光照节律下的表达变化 | 第58-60页 |
| ·Tim 在不同光照节律下的表达变化 | 第60-63页 |
| ·Clk 在不同光照节律下的表达变化 | 第63-64页 |
| ·Cyc 在不同光照节律下的表达变化 | 第64页 |
| 第二节 温度节律对家蚕 BmN 细胞中生物钟基因表达的影响 | 第64-67页 |
| 1.材料与方法 | 第64-65页 |
| ·供试细胞系为家蚕 BmN 细胞系 | 第64-65页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 第1条链的合成 | 第65页 |
| ·基因表达谱分析 | 第65页 |
| ·基因表达数据处理方法 | 第65页 |
| 2.结果与分析 | 第65-67页 |
| 第三节 本章讨论 | 第67-70页 |
| 1 家蚕 BmN 细胞中存在着内源的生物钟系统 | 第67页 |
| 2 光照是影响家蚕 BmN 细胞中生物钟基因的表达变化的重要授时因子 | 第67-68页 |
| 3 温度节律能引起家蚕 BmN 细胞中生物钟基因表达量的变化 | 第68页 |
| 4 温度能对稳定光照条件下的 BmN 细胞生物钟系统起补偿作用 | 第68页 |
| 5 细胞免疫荧光亚定位假阳性结果原因分析 | 第68-70页 |
| 第六章 干涉 BmN 细胞的核心钟基因对环路中其它基因表达的影响 | 第70-78页 |
| 第一节 干涉 Cry1 基因对于 BmN 细胞生物钟基因表达的影响 | 第70-73页 |
| 1 材料与方法 | 第70-72页 |
| ·供试细胞系为家蚕 BmN 细胞系 | 第70页 |
| ·细胞干涉 | 第70-71页 |
| ·总RNA提取及cDNA 第1条链的合成 | 第71页 |
| ·基因表达谱分析 | 第71-72页 |
| ·数据处理方法 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-73页 |
| ·干涉 Cry1基因对BmN细胞生物钟基因表达的影响 | 第72-73页 |
| 第二节 干涉 Per 基因对于BmN 细胞生物钟基因表达的影响 | 第73-76页 |
| 1 材料与方法 | 第73-74页 |
| ·供试细胞系为家蚕 BmN 细胞系 | 第73页 |
| ·细胞干涉 | 第73-74页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 第1条链的合成 | 第74页 |
| ·基因表达谱分析 | 第74页 |
| ·数据处理方法 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-76页 |
| 第三节 本章讨论 | 第76-78页 |
| 1 Cry1和Per基因表达在BmN细胞生物钟中发挥重要的互作作用 | 第76页 |
| 2 Cyc 基因可能是 BmN 中授时因子信号输入环路中影响较小的基因 | 第76页 |
| 3 Cry1 和 Cry2 可能处于 BmN 细胞生物钟中的不同环路中 | 第76页 |
| 4 Per 基因在家蚕生物钟环路中具有比 Cry1 基因广泛的作用 | 第76-78页 |
| 第七章 综合结论 | 第78-81页 |
| 1 家蚕 BmN 细胞中存在着内源的生物钟系统 | 第78页 |
| 2 温度、光照时家蚕 BmN 细胞中重要的授时因子，温度能对光照恒定时的家蚕 BmN 生物钟有一定的补偿作用 | 第78-79页 |
| 3 BmN 细胞中，Cry1、Cry2可能是分别作为光信号、温度信号接受因子发挥作用的 | 第79页 |
| 4 Cry1 和 Per 直接存在着一定的互作关系，且 Per 基因在家蚕生物钟环路中的作用可能比 Cry1 基因更大 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 研究生期间发表文章 | 第91-92页 |
| 论文资助项目 | 第92-93页 |
| 附录 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
