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腺病毒初免蛋白加强免疫策略联合DDA/MPL佐剂增强survivin/MUC1特异性抗肿瘤作用研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-17页
第一章 前言第17-37页
   ·肿瘤的发展及治疗现状第17-18页
   ·肿瘤疫苗第18-23页
     ·肿瘤疫苗的作用机制第18-19页
     ·肿瘤疫苗的研究进展第19-21页
     ·肿瘤疫苗的分类第21-22页
     ·肿瘤疫苗其他肿瘤治疗手段的联合应用第22-23页
   ·影响肿瘤蛋白疫苗的因素第23-26页
     ·免疫佐剂第23-24页
     ·prime-boost免疫策略第24-26页
   ·肿瘤靶点的选择第26-34页
     ·survivin的分子结构和生物学功能第26-29页
     ·MUC1的分子结构和生物学功能第29-30页
     ·survivin和MUC1在肿瘤中的表达第30-31页
     ·survivin和MUC1疫苗的研究进展第31-34页
   ·论文的立题依据及设计第34-37页
     ·立题依据第34-35页
     ·本论文要解决的问题第35页
     ·实验设计第35-37页
第二章 实验材料与方法第37-49页
   ·实验材料第37-40页
     ·菌株,细胞株,病毒,质粒,动物第37-38页
     ·抗体第38页
     ·肽合成第38页
     ·引物合成第38-39页
     ·主要试剂第39页
     ·常规试剂第39-40页
     ·主要仪器第40页
   ·实验方法第40-49页
     ·质粒构建与制备第40-41页
       ·pRSET B-S8的构建第40-41页
       ·pET26B-9M的构建第41页
     ·蛋白表达纯化第41-42页
       ·S8蛋白原核表达纯化与鉴定第41页
       ·9M蛋白原核表达纯化与鉴定第41-42页
       ·蛋白定量第42页
     ·ELISA法测定肿瘤患者血清中抗体第42页
     ·细胞培养基本操作第42-43页
       ·细胞复苏第42页
       ·细胞冻存第42页
       ·细胞培养第42-43页
     ·免疫效果评价第43-46页
       ·脾细胞处理方案第43页
       ·ELISpot实验检测分泌IFN-γ的淋巴细胞数目第43-44页
       ·CTL杀伤功能的检测第44-45页
       ·细胞因子检测第45页
       ·抗体分型检测第45-46页
       ·T细胞激活检测第46页
       ·淋巴细胞增殖检测第46页
     ·小鼠肿瘤细胞抑制实验和生存期实验第46-48页
       ·实验动物的准备第46-47页
       ·肿瘤细胞的准备第47页
       ·肿瘤细胞的接种第47页
       ·给药方式第47页
       ·实验分组第47页
       ·肿瘤治疗实验组别设计第47-48页
       ·肿瘤体积变化观察第48页
       ·荷瘤小鼠体内免疫反应的检测第48页
       ·小鼠生存情况观察第48页
     ·统计学处理方法第48-49页
第三章 实验结果与讨论第49-95页
   ·Survivin疫苗的抗肿瘤效果研究第49-65页
     ·pRSET B-S8的构建及S8蛋白表达纯化第49-51页
       ·pRSET B-S8的构建第49-50页
       ·survivin蛋白表达纯化第50-51页
     ·S8蛋白疫苗的免疫原性研究第51-59页
       ·蛋白疫苗免疫佐剂的选择第51-55页
         ·小鼠免疫实验设计第51-52页
         ·佐剂对蛋白疫苗免疫反应的增强作用第52-55页
       ·prime-boost免疫策略的优化第55-59页
     ·疫苗抗肿瘤活性检测及抗肿瘤机制研究第59-62页
       ·疫苗的抗肿瘤活性检测第59-61页
       ·疫苗抗肿瘤效应机制研究第61-62页
     ·疫苗与化药联用后的抗肿瘤效应第62-65页
       ·实验设计第62-64页
       ·疫苗与化药联用的免疫学机制及疫苗安全性研究第64-65页
     ·小结第65页
   ·以 MUC1为靶点的肿瘤疫苗活性研究第65-72页
     ·pET26B-9M的构建及MUC1蛋白表达纯化第66-67页
       ·pET26B-9M的构建第66页
       ·MUC1蛋白表达纯化第66-67页
     ·DDA/MPL对9M重组蛋白诱导免疫反应的增强作用第67-69页
     ·AD-9M/9M pro的抗肿瘤效应研究第69-70页
     ·AD-9M/9M pro疫苗抗肿瘤机制研究第70-71页
     ·小结第71-72页
   ·survivin与MUC1联合疫苗抗黑色素瘤效果评价第72-75页
     ·免疫实验设计第72-73页
     ·疫苗对黑色素瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用和生命延长作用第73-74页
     ·疫苗抗肿瘤机制研究第74-75页
     ·小结第75页
   ·疫苗联合化药使用抗黑色素瘤效果评价第75-79页
     ·实验设计第75-76页
     ·联合使用疫苗对黑色素瘤小鼠抗肿瘤作用评价第76-78页
     ·化药对疫苗的免疫增强作用机制研究第78页
     ·小结第78-79页
   ·survivin与MUC1联合疫苗对于其他类型小鼠的抗肿瘤作用研究第79-91页
     ·不同类型肿瘤患者血清中survivin及MUC1抗体的检测第79-84页
       ·肠癌患者血清中survivin及MUC1抗体的检测第79-82页
       ·乳腺癌患者血清中survivin及MUC1抗体检测第82-83页
       ·其他的4种肿瘤患者血清中survivin及MUC1抗体检测第83-84页
     ·疫苗联合化药使用抗结肠癌效果评价第84-88页
       ·实验设计第84-85页
       ·联合使用疫苗对结肠癌小鼠肿瘤抗肿瘤作用评价第85-87页
       ·疫苗的抗肿瘤机制研究第87-88页
     ·疫苗联合化药使用抗乳腺癌效果评价第88-91页
       ·实验设计第88页
       ·联合使用疫苗对乳腺癌小鼠抗肿瘤作用评价第88-90页
       ·联合使用疫苗对乳腺癌小鼠抗肿瘤作用机制研究第90-91页
     ·小结第91页
   ·讨论第91-95页
结论第95-97页
参考文献第97-107页
作者简历及攻读博士学位期间发表论文第107-109页
致谢第109页

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