| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词列表 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-28页 |
| ·问题的提出与研究意义 | 第14页 |
| ·国内外研究现状 | 第14-24页 |
| ·气道高反应性在哮喘病中的研究 | 第14-15页 |
| ·气道平滑肌细胞在哮喘病中扮演重要角色 | 第15-16页 |
| ·气道平滑肌细胞力学行为测定 | 第16-18页 |
| ·哮喘相关基因研究 | 第18-20页 |
| ·ADAMs 与哮喘 | 第20-21页 |
| ·ADAM33 对气道平滑肌细胞的影响 | 第21-24页 |
| ·课题的研究目的及研究内容 | 第24-28页 |
| ·课题的研究目的与意义 | 第24页 |
| ·课题的研究内容 | 第24-25页 |
| ·课题研究的技术路线 | 第25页 |
| ·课题的创新点 | 第25-28页 |
| 2 ADAM33 在 SD 大鼠哮喘模型中的表达研究 | 第28-44页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料、仪器与试剂 | 第28-30页 |
| ·实验动物模型的来源 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·主要实验试剂 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-36页 |
| ·OVA 刺激下的 SD 大鼠哮喘模型的制备 | 第30页 |
| ·对 SD 大鼠哮喘模型的鉴定 | 第30-31页 |
| ·SD 大鼠哮喘模型的气道平滑肌细胞的培养 | 第31-32页 |
| ·提取 SD 大鼠哮喘模型气道平滑肌细胞总 RNA 及运用定量 RT-PCR 检测其ADAM33 mRNA 的表达水平 | 第32-34页 |
| ·提取 SD 大鼠哮喘模型气道平滑肌细胞总蛋白及运用 Western blot 检测其ADAM33 蛋白的表达水平 | 第34-36页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·对 SD 大鼠哮喘模型的测定结果 | 第36-38页 |
| ·气道平滑肌细胞鉴定结果 | 第38-40页 |
| ·ADAM33 基因及蛋白在 OVA 雾化不同周数的哮喘模型的气道平滑肌细胞中的表达模式 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 3 慢病毒转染正常 SD 大鼠气道平滑肌细胞调控 ADAM33 基因表达31 | 第44-70页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第44页 |
| ·细胞来源及培养 | 第44页 |
| ·主要实验试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-53页 |
| ·慢病毒技术 | 第44-45页 |
| ·ADM33 超表达载体 pLVX-EGFP-3FLAG 的构建及鉴定 | 第45-48页 |
| ·ADAM33 慢病毒 RNA 干扰载体 pMagic 4.1 的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·慢病毒的包装、浓缩和滴度测定 | 第49-52页 |
| ·慢病毒转染气道平滑肌细胞 | 第52-53页 |
| ·慢病毒实验注意事项 | 第53页 |
| ·提取转染细胞的总 RNA 及总蛋白，定量 RT-PCR 和 Western blot 检测 ADAM33表达量 | 第53页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-67页 |
| ·ADM33 的超表达载体 pLVX-EGFP-3FLAG 的构建及鉴定 | 第54-57页 |
| ·ADM33 的干扰载体 pMagic 4.1 的构建及鉴定 | 第57-62页 |
| ·重组慢病毒滴度的确定 | 第62-64页 |
| ·重组慢病毒转染正常 SD 大鼠气道平滑肌细胞 | 第64-65页 |
| ·重组慢病毒成功转染正常 SD 大鼠气道平滑肌细胞，并有效调控气道平滑肌细胞 ADAM33 基因的表达 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 4 调控 ADAM33 基因的表达对气道平滑肌细胞生物学行为影响的研究 | 第70-80页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·材料和方法 | 第71-72页 |
| ·MTT 法检测转染细胞的增殖能力 | 第71页 |
| ·Transwell 小室法检测细胞的跨膜迁移能力 | 第71-72页 |
| ·细胞划痕法检验细胞横向迁移能力 | 第72页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-77页 |
| ·ADAM33 基因对细胞增殖能力的影响 | 第72-73页 |
| ·ADAM33 基因调控对细胞迁移能力的影响 | 第73-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78-80页 |
| 5 调控 ADAM33 基因的表达对气道平滑肌细胞生物力学行为影响的研究 | 第80-100页 |
| ·引言 | 第80-81页 |
| ·材料与方法 | 第81-91页 |
| ·运用磁微粒扭转细胞测量系统测定细胞的刚度和收缩力 | 第81-86页 |
| ·运用傅里叶变换牵引力显微术（FTTM）测量细胞牵引力大小 | 第86-90页 |
| ·共聚焦显微镜对转染细胞的 ADAM33 和 vinculin 蛋白的共定位免疫荧光染色观察 | 第90-91页 |
| ·总 RNA 的提取，定量 RT-PCR 检测与力学相关基因的表达 | 第91页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第91-92页 |
| ·结果 | 第92-96页 |
| ·ADM33 调控对细胞刚度和收缩力的影响 | 第92-93页 |
| ·ADAM33 调控对细胞牵张力大小的影响 | 第93-94页 |
| ·细胞的 ADM33 和 vinculin 蛋白的共定位免疫荧光染色结果 | 第94-95页 |
| ·调控 ADAM33 对细胞生物力学相关基因表达的影响 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·本章小结 | 第99-100页 |
| 6 后续研究展望 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 附录 | 第116页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第116页 |
| B. 作者在攻读学位期间参加科研项目情况 | 第116页 |
