摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-9页 |
第一章 文献综述 | 第9-50页 |
·果蝇精子发生的基本过程特征 | 第9-11页 |
·家蚕精子的形成 | 第11-13页 |
·精子生成过程中相关基因的表达 | 第13-17页 |
·果蝇减数分裂阻滞基因 | 第17-26页 |
·同源异型基因 | 第26-27页 |
·TGIF 蛋白 | 第27-29页 |
·BmNPV 的研究进展 | 第29-30页 |
·RNAi 研究的历史进展 | 第30-31页 |
·RNAi 的作用机制 | 第31页 |
·RNAi 干涉的特征 | 第31-33页 |
·RNAi 在家蚕上的确认与应用 | 第33-36页 |
·家蚕转基因研究进展 | 第36-47页 |
·转基因家蚕的应用、总结与展望 | 第47-50页 |
第二章 一般材料与方法 | 第50-67页 |
1 实验材料 | 第50-56页 |
·载体与菌种 | 第50页 |
·生物材料 | 第50页 |
·工具酶及试剂盒 | 第50页 |
·其它试剂 | 第50-51页 |
·主要实验试剂与配制 | 第51-56页 |
2 常用仪器 | 第56-57页 |
3 常用的实验方法 | 第57-67页 |
·感受态细胞的制备 | 第57页 |
·DNA 的连接反应体系(10 μL) | 第57页 |
·连接产物的转化 | 第57页 |
·重组质粒的筛选 | 第57-58页 |
·碱裂解法少量制备质粒 DNA | 第58页 |
·DNA 的酶切反应体系 | 第58-59页 |
·基因组 DNA 提取 | 第59-60页 |
·目的片段的分离和回收 | 第60页 |
·PCR 扩增目的片段 | 第60-61页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第61页 |
·SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第61-62页 |
·SDS-PAGE 凝胶的染色和脱色 | 第62页 |
·Western blotting | 第62-63页 |
·过柱纯化蛋白 | 第63-64页 |
·免疫小鼠,制备多克隆抗体 | 第64-65页 |
·总 RNA 提取 | 第65页 |
·RNA 反转录成 cDNA | 第65页 |
·细胞的培养和保存 | 第65页 |
·定量 PCR(Quantitative PCR.qPCR) | 第65-66页 |
·Native PAGE 电泳 | 第66-67页 |
第三章 家蚕 achi 基因对精子发生过程的调控 | 第67-101页 |
摘要 | 第67-69页 |
1 材料与方法 | 第69-76页 |
·试剂材料 | 第69-70页 |
·实验方法 | 第70-76页 |
2 结果与分析 | 第76-97页 |
·Bmachi 的同源性比较 | 第76-80页 |
·BmAchi 的进化分析 | 第80页 |
·Bmachi 的表达谱分析 | 第80-83页 |
·Bmachi 的亚细胞定位 | 第83-85页 |
·BmAchi-L 是转录激活因子 | 第85-88页 |
·BmAchi 蛋白和靶 DNA 的结合 | 第88页 |
·抑制 Bmachi 表达对家蚕精细胞发育的影响 | 第88-94页 |
·BmAchi 蛋白与 BmAly 蛋白具有相互作用 | 第94-97页 |
3 讨论 | 第97-101页 |
第四章 转基因细胞/家蚕 RNAi 对 BmNPV 增殖抑制的研究 | 第101-116页 |
摘要 | 第101-103页 |
1 材料与方法 | 第103-107页 |
·材料 | 第103-104页 |
·方法 | 第104-107页 |
2 结果与分析 | 第107-113页 |
·稳定转化细胞的筛选 | 第107页 |
·稳定转化细胞的 PCR 鉴定 | 第107-108页 |
·稳定转化细胞对 BmNPV 的抑制作用 | 第108页 |
·Q-PCR 检测 ie-1 的转录水平 | 第108-109页 |
·转基因家蚕的筛选和分子生物学鉴定 | 第109-112页 |
·G5 代 3 龄转基因家蚕对 BmNPV 的抗性 | 第112-113页 |
3 讨论 | 第113-116页 |
结论与创新点 | 第116-117页 |
参考文献 | 第117-138页 |
资助项目 | 第138-139页 |
致谢 | 第139-140页 |