| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 绪论 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1．1 生物技术 | 第17-26页 |
| l．1．1 生物技术产品的发展 | 第17-19页 |
| 1．1．2 生物技术的应用 | 第19-20页 |
| 1．1．3 生物上游技术 | 第20-22页 |
| 1．1．4 生物下游技术 | 第22-26页 |
| 1．2 人表皮生长因子 | 第26-35页 |
| 1．2．1 hEGF概述 | 第26-27页 |
| 1．2．1．1 hEGF家族 | 第26页 |
| 1．2．1．2 hEGF受体 | 第26-27页 |
| 1．2．1．3 hEGF基因 | 第27页 |
| 1．2．1．4 hEGF的分布 | 第27页 |
| 1．2．2 hEGF的化学结构和空间结构 | 第27-29页 |
| 1．2．2．1 hEGF的化学结构 | 第27-28页 |
| 1．2．2．2 hEGF的空间结构 | 第28-29页 |
| 1．2．2．3 hEGF的结构与功能关系 | 第29页 |
| 1．2．3 hEGF的理化性质及生物学作用 | 第29-30页 |
| 1．2．3．1 hEGF的理化性质 | 第29页 |
| 1．2．3．2 hEGF的生物学作用 | 第29-30页 |
| 1．2．4 hEGF的发酵 | 第30-31页 |
| 1．2．5 hEGF的分离纯化 | 第31-33页 |
| 1．2．5．1 天然hEGF的分离纯化 | 第31-32页 |
| 1．2．5．2 重组hEGF的分离纯化 | 第32-33页 |
| l．2．6 EGF（hEGF）的测定方法 | 第33-35页 |
| l．2．6．1 生物活性检测 | 第33-34页 |
| 1．2．6．2 放射分析法 | 第34页 |
| 1．2．6．3 酶免疫分析 | 第34页 |
| 1．2．6．4 酶联免疫吸附分析 | 第34页 |
| 1．2．6．5 免疫荧光分析 | 第34-35页 |
| 1．2．6．6 反相HPLC | 第35页 |
| 1．3 研究思路与目标 | 第35-37页 |
| 1．3．1 研究目标 | 第35页 |
| 1．3．2 工艺设计 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-43页 |
| 第二章 人表皮生长因子的定量检测 | 第43-51页 |
| 2．1 引言 | 第43页 |
| 2．2 材料与方法 | 第43-45页 |
| 2．2．1 仪器与试剂 | 第43-44页 |
| 2．2．2 hEGF的定性分析 | 第44页 |
| 2．2．3 hEGF的定量分析 | 第44-45页 |
| 2．2．3．1 实验原理 | 第44页 |
| 2．2．3．2 实验设计 | 第44-45页 |
| 2．3 结果与讨论 | 第45-49页 |
| 2．3．1 hEGF标准曲线的制定 | 第45-46页 |
| 2．3．2 hEGF标准曲线的延伸 | 第46-47页 |
| 2．3．3 hEGF的在线检测 | 第47页 |
| 2．3．4 分离结果验证 | 第47-49页 |
| 2．4 本章小结 | 第49页 |
| 符号说明 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第三章 重组人表皮生长因子的发酵 | 第51-73页 |
| 3．1 引言 | 第51-53页 |
| 3．1．1 hEGF分泌表达系统的建立 | 第51-52页 |
| 3．1．2 hEGF的发酵 | 第52-53页 |
| 3．1．2．1 操纵子学说 | 第52页 |
| 3．1．2．2 E．coli的二次生长 | 第52-53页 |
| 3．2 实验材料与方法 | 第53-54页 |
| 3．2．1 菌种 | 第53页 |
| 3．2．2 培养基 | 第53页 |
| 3．2．3 培养方法 | 第53-54页 |
| 3．2．4 细胞生长测定 | 第54页 |
| 3．2．5 葡萄糖测定 | 第54页 |
| 3．2．6 hEGF测定 | 第54页 |
| 3．3 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 3．3．1 理化因素对工程菌生长的影响 | 第54-57页 |
| 3．3．1．1 Amp对工程菌生长的影响 | 第54-55页 |
| 3．3．1．2 IPTG对工程菌生长的影响 | 第55-56页 |
| 3．3．1．3 接种量对工程菌生长的影响 | 第56页 |
| 3．3．1．4 工程菌二次生长曲线的测定 | 第56-57页 |
| 3．3．2 发酵过程中的参数测定 | 第57-60页 |
| 3．3．2．1 pH值的测定 | 第57-58页 |
| 3．3．2．2 底物消耗的测定 | 第58-59页 |
| 3．3．2．3 hEGF的分泌 | 第59-60页 |
| 3．3．3． 重组E．coli生产hEGF的发酵条件优化 | 第60-65页 |
| 3．3．3．1 发酵优化的设计思路 | 第60-61页 |
| 3．3．3．2 正交优化设计方案 | 第61页 |
| 3．3．3．3 正交实验结果与分析 | 第61-65页 |
| 3．4 重组E．coli产hEGF的发酵动力学模型 | 第65-69页 |
| 3．4．1 动力学模型的建立 | 第65-66页 |
| 3．4．2 动力学模型的求解 | 第66-68页 |
| 3．4．3 误差分析 | 第68-69页 |
| 3．5 本章小结 | 第69-70页 |
| 符号说明 | 第70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 第四章 离子交换层析法分离人表皮生长因子 | 第73-105页 |
| 4．1 引言 | 第73-76页 |
| 4．1．1 离子交换机理 | 第73-74页 |
| 4．1．2 离子交换理论 | 第74-75页 |
| 4．1．3 离子交换剂 | 第75-76页 |
| 4．2 材料与方法 | 第76-105页 |
| 4．2．1 仪器与试剂 | 第76页 |
| 4．2．2 实验方法 | 第76-77页 |
| 4．2．2．1 发酵液预处理 | 第76页 |
| 4．2．2．2 hEGF的离子交换层析 | 第76-77页 |
| 4．2．2．3 hEGF的测定 | 第77页 |
| 4．3． 结果与讨论 | 第77-96页 |
| 4．3．1 线性流速对hEGF分离特性的影响 | 第77-81页 |
| 4．3．1．1 线性流速对保留体积的影响 | 第78-79页 |
| 4．3．1．2 线性流速对收集峰面积％的影响 | 第79-80页 |
| 4．3．1．3 线性流速对其它分离结果的影响 | 第80-81页 |
| 4．3．2 进样量对hEGF分离的影响 | 第81-84页 |
| 4．3．2．1 进样量对保留体积的影响 | 第81-82页 |
| 4．3．2．2 进样量对收集峰面积％的影响 | 第82-83页 |
| 4．3．2．3 进样量对其它分离结果的影响 | 第83-84页 |
| 4．3．3 柱床高度对hEGF分离的影响 | 第84-86页 |
| 4．3．3．1 柱床高度对保留体积的影响 | 第85页 |
| 4．3．3．2 柱床高度对收集峰面积％的影响 | 第85-86页 |
| 4．3．3．3 柱床高度对其它分离结果的影响 | 第86页 |
| 4．3．4 洗脱液离子浓度梯度对hEGF分离的影响 | 第86-89页 |
| 4．3．4．1 梯度长度对保留体积的影响 | 第87-88页 |
| 4．3．4．2 梯度长度对收集峰面积％的影响 | 第88-89页 |
| 4．3．4．3 梯度长度对其它分离结果的影响 | 第89页 |
| 4．3．5 pH对hEGF分离的影响 | 第89-93页 |
| 4．3．5．1 pH对保留体积的影响 | 第90-91页 |
| 4．3．5．2 pH对收集峰面积％的影响 | 第91-92页 |
| 4．3．5．3 pH对其它分离结果的影响 | 第92-93页 |
| 4．3．6 进样浓度对hEGF分离的影响 | 第93-95页 |
| 4．3．6．1 进样浓度对保留体积的影响 | 第93-94页 |
| 4．3．6．2 进样浓度对收集峰面积％的影响 | 第94-95页 |
| 4．3．6．3 进样浓度对其它分离结果的影响 | 第95页 |
| 4．3．7 优化结果 | 第95-96页 |
| 4．4 填充床吸附hEGF的保留模型 | 第96-100页 |
| 4．5 本章小结 | 第100-101页 |
| 符号说明 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 第五章 扩张床吸附分离人表皮生长因子 | 第105-127页 |
| 5．1 引言 | 第105-107页 |
| 5．1．1 扩张床吸附原理 | 第105-106页 |
| 5．1．2 扩张床吸附剂 | 第106-107页 |
| 5．2 材料与方法 | 第107-127页 |
| 5．2．1 仪器与试剂 | 第107-108页 |
| 5．2．2 实验方法 | 第108页 |
| 5．2．2．1 发酵液预处理 | 第108页 |
| 5．2．2．2 hEGF的扩张床吸附层析 | 第108页 |
| 5．2．2．3 hEGF的测定 | 第108页 |
| 5．3． 结果与讨论 | 第108-121页 |
| 5．3．1 线性流速对hEGF分离特性的影响 | 第109-112页 |
| 5．3．1．1 线性流速对保留体积的影响 | 第110页 |
| 5．3．1．2 线性流速对收集峰面积％的影响 | 第110-111页 |
| 5．3．1．3 线性流速对其它分离结果的影响 | 第111-112页 |
| 5．3．2 进样量对hEGF分离的影响 | 第112-114页 |
| 5．3．2．1 进样量对保留体积的影响 | 第112页 |
| 5．3．2．2 进样量对收集峰面积％的影响 | 第112-113页 |
| 5．3．2．3 进样量对其它分离结果的影响 | 第113-114页 |
| 5．3．3 洗脱液离子浓度梯度对hEGF分离的影响 | 第114-116页 |
| 5．3．3．1 梯度长度对保留体积的影响 | 第114-115页 |
| 5．3．3．2 梯度长度对收集峰面积％的影响 | 第115页 |
| 5．3．3．3 梯度长度对其它分离结果的影响 | 第115-116页 |
| 5．3．4 pH对hEGF分离的影响 | 第116-117页 |
| 5．3．4．1 pH对保留体积的影响 | 第116页 |
| 5．3．4．2 pH对收集峰面积％的影响 | 第116-117页 |
| 5．3．4．3 pH对其它分离结果的影响 | 第117页 |
| 5．3．5 进样浓度对hEGF分离的影响 | 第117-119页 |
| 5．3．5．1 进样浓度对保留体积的影响 | 第118页 |
| 5．3．5．2 进样浓度对收集峰面积％的影响 | 第118-119页 |
| 5．3．5．3 进样浓度对其它分离结果的影响 | 第119页 |
| 5．3．6 优化结果 | 第119-121页 |
| 5．4 扩张床吸附hEGF的保留模型 | 第121-123页 |
| 5．5 本章小结 | 第123-124页 |
| 符号说明 | 第124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第六章 凝胶层析分离人表皮生长因子 | 第127-149页 |
| 6．1 引言 | 第127-130页 |
| 6．1．1 凝胶层析机理 | 第127-128页 |
| 6．1．2 凝胶层析理论 | 第128-129页 |
| 6．1．3 凝胶类型 | 第129-130页 |
| 6．2 材料与方法 | 第130页 |
| 6．2．1 仪器与试剂 | 第130页 |
| 6．2．2 实验方法 | 第130页 |
| 6．2．2．1 盐析 | 第130页 |
| 6．2．2．2 hEGF的凝胶层析分离 | 第130页 |
| 6．2．2．3 hEGF的测定 | 第130页 |
| 6．3 结果与讨论 | 第130-143页 |
| 6．3．1 凝胶参数的测定 | 第131页 |
| 6．3．2 洗脱流速对hEGF分离特性的影响 | 第131-135页 |
| 6．3．2．1 线性流速对保留体积的影响 | 第132-133页 |
| 6．3．2．2． 线性流速对分配系数的影响 | 第133-134页 |
| 6．3．2．3 线性流速对标准方差的影响 | 第134页 |
| 6．3．2．4 线性流速对分离度的影响 | 第134-135页 |
| 6．3．3 进样体积对hEGF分离特性的影响 | 第135-138页 |
| 6．3．3．1 进样体积对保留体积的影响 | 第135-136页 |
| 6．3．3．2.进样体积对分配系数的影响 | 第136-137页 |
| 6．3．3．3 进样体积对标准方差的影响 | 第137页 |
| 6．3．3．4 进样体积对分离度的影响 | 第137-138页 |
| 6．3．4 柱床高度对hEGF分离特性的影响 | 第138-141页 |
| 6．3．4．1 柱床高度对保留体积的影响 | 第138-139页 |
| 6．3．4．2． 柱床高度对分配系数的影响 | 第139页 |
| 6．3．4．3 柱床高度对标准方差的影响 | 第139-140页 |
| 6．3．4．4 柱床高度对分离度的影响 | 第140-141页 |
| 6．3．5 优化结果 | 第141-143页 |
| 6．4 hEGF凝胶分离的理论板模型 | 第143-145页 |
| 6．5 本章小结 | 第145-146页 |
| 符号说明 | 第146-147页 |
| 参考文献 | 第147-149页 |
| 第七章 人表皮生长因子的分离思路与工艺 | 第149-163页 |
| 7．1 引言 | 第149页 |
| 7．2 分离思路 | 第149-151页 |
| 7．2．1 蛋白质纯化方案 | 第149-150页 |
| 7．2．2 hEGF纯化设计 | 第150-151页 |
| 7．3 hEGF的前期分离准备 | 第151-156页 |
| 7．3．1 盐析 | 第151-153页 |
| 7．3．1．1 盐析原理 | 第151-152页 |
| 7．3．1．2 hEGF的盐析方法 | 第152-153页 |
| 7．3．2 hEGF的理化性质 | 第153页 |
| 7．3．3 发酵液理化性质分析 | 第153-156页 |
| 7．3．3．1 发酵液中蛋白质分子量的测定 | 第153-155页 |
| 7．3．3．2 发酵液中蛋白质等电点的测定 | 第155-156页 |
| 7．4 hEGF的分离工艺 | 第156-157页 |
| 7．4．1 纯化工艺流程1 | 第156页 |
| 7．4．1．1 工艺流程 | 第156页 |
| 7．4．1．2 工艺条件 | 第156页 |
| 7．4．2 纯化工艺流程2 | 第156-157页 |
| 7．4．2．1 工艺流程 | 第156页 |
| 7．4．2．2 工艺条件 | 第156-157页 |
| 7．4．3 纯化工艺流程3 | 第157页 |
| 7．4．3．1 工艺流程 | 第157页 |
| 7．4．3．2 工艺条件 | 第157页 |
| 7．5 工艺结果及比较 | 第157-159页 |
| 7．6 生产成本核算 | 第159-160页 |
| 符号说明 | 第160页 |
| 参考文献 | 第160-163页 |
| 结论与建议 | 第163-166页 |
| 致谢 | 第166-167页 |
| 论文发表情况 | 第167页 |
