应用双荧光T-RFLP对大连溢油污染区的生物评价
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-26页 |
| ·石油污染 | 第12-15页 |
| ·石油污染的危害 | 第12-13页 |
| ·大连新港石油泄漏污染 | 第13-15页 |
| ·海洋污染的评价方法 | 第15-21页 |
| ·生物暴露指数 | 第15页 |
| ·生物反应指数 | 第15页 |
| ·生物分布指数(即生物多样性指数) | 第15-21页 |
| ·微生物多样性 | 第16页 |
| ·微生物多样性用于污染评价的优势 | 第16-17页 |
| ·微生物多样性的研究方法 | 第17-21页 |
| ·T-RFLP技术 | 第21-25页 |
| ·T-RFLP技术原理 | 第21-22页 |
| ·T-RFLP分析技术的优势和缺陷 | 第22-23页 |
| ·T-RFLP分析技术在微生物群落研究中的应用 | 第23-25页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-34页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·底泥实验材料 | 第26-27页 |
| ·主要试剂及酶 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·常用试剂及配方 | 第28页 |
| ·底泥样品宏基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测及核酸浓度测定 | 第29-30页 |
| ·非荧光引物PCR扩增条件的优化 | 第30-31页 |
| ·限制性内切酶进行酶切反应 | 第31页 |
| ·酶切反应产物的脱盐处理 | 第31-32页 |
| ·毛细管电泳检测 | 第32页 |
| ·双荧光标记T-RFLP的建立 | 第32-33页 |
| ·酶切产物稀释倍数的确立 | 第32-33页 |
| ·单荧光标记与双荧光标记获得结果的比较 | 第33页 |
| ·样品经不同位置毛细管电泳后结果的比较 | 第33页 |
| ·数据分析 | 第33-34页 |
| 第3章 结果 | 第34-62页 |
| ·底泥样品宏基因组DNA的提取及浓度测定 | 第34-35页 |
| ·非荧光引物PCR扩增条件的优化 | 第35-37页 |
| ·PCR反应体系及反应条件的优化 | 第35-36页 |
| ·选用优化条件对全部14个样品的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·双荧光标记T-RFLP实验平台的建立 | 第37-42页 |
| ·酶切产物稀释倍数的确立 | 第37-38页 |
| ·单荧光标记与双荧光标记获得结果的比较 | 第38-39页 |
| ·样品经不同位置毛细管电泳后结果的比较 | 第39-42页 |
| ·大连溢油事故前后相关海域14份底泥样品分析 | 第42-62页 |
| ·双荧光标记T-RFLP图谱分析 | 第42-47页 |
| ·单样品MspI酶切图谱分析 | 第42-43页 |
| ·单样品RsaI酶切图谱分析 | 第43-45页 |
| ·14个样品MspI和RsaI酶切图谱分析 | 第45-47页 |
| ·双荧光标记T-RFs数目分析 | 第47-52页 |
| ·MspI酶切得到的T-RFs数目分析 | 第47-49页 |
| ·RsaI酶切得到的T-RFs数目分析 | 第49-52页 |
| ·细菌优势群落结构分析 | 第52-56页 |
| ·样地间相似性分析及聚类结果 | 第56-61页 |
| ·样地间相似性分析及聚类结果(上游引物) | 第57-59页 |
| ·样地间相似性分析及聚类结果(下游引物) | 第59-61页 |
| ·综合分析结果 | 第61-62页 |
| 第4章 讨论 | 第62-64页 |
| ·T-F-P技术的相关注意事项 | 第62-63页 |
| ·双荧光标记得到结果变化不一致的可能原因 | 第63-64页 |
| 结论与展望 | 第64-65页 |
| 1 结论 | 第64页 |
| 2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 群落结构分析表 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 研究生履历 | 第80页 |
