前言 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
英文缩写词表 | 第12-13页 |
第1章 绪论 | 第13-21页 |
·BCCIP 基因与蛋白结构 | 第13-14页 |
·BCCIP 蛋白功能研究进展 | 第14-21页 |
·在细胞周期调控中的作用 | 第14-15页 |
·在同源重组修复中的作用 | 第15-17页 |
·维持基因组稳定性 | 第17-18页 |
·BCCIP 的肿瘤相关性 | 第18-19页 |
·BCCIP 对神经发育的影响 | 第19-20页 |
·BCCIP 的其它研究 | 第20-21页 |
第2章 PAK1IP1 与 BCCIP 相互作用的鉴定 | 第21-46页 |
·材料和方法 | 第22-35页 |
·主要试剂及来源 | 第22-23页 |
·质粒和菌株 | 第23页 |
·细胞培养 | 第23-24页 |
·pOZ-FH-C1-BCCIP 重组质粒的构建 | 第24-29页 |
·细胞转染 | 第29-30页 |
·免疫共沉淀 | 第30-31页 |
·免疫印迹(Western Blot)检测 | 第31-33页 |
·PAK1IP1 原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
·重组蛋白的诱导表达 | 第34页 |
·重组蛋白体外 Pull down 反应 | 第34-35页 |
·实验结果 | 第35-42页 |
·Flag 标签在 BCCIP N 末端的外源性蛋白与细胞内源性蛋白的免疫共沉淀反应 | 第35-36页 |
·Flag 标签在 BCCIP C 末端的外源性蛋白与细胞内源性蛋白的免疫共沉淀反应 | 第36-38页 |
·在大肠杆菌中重组 BCCIP 与 PAK1IP1 的结合实验 | 第38-42页 |
·讨论 | 第42-45页 |
·小结 | 第45-46页 |
第3章 PAK1IP1 与 BCCIP 相互作用区域的鉴定 | 第46-67页 |
·材料和方法 | 第46-54页 |
·主要试剂及来源 | 第46页 |
·质粒和菌株 | 第46页 |
·PAK1IP1 片段与内源性 BCCIP 的免疫共沉淀反应 | 第46-50页 |
·BCCIP 片段与 PAK1IP1 内源性的免疫共沉淀反应 | 第50-54页 |
·实验结果 | 第54-63页 |
·PAK1IP1 片段与内源性 BCCIP 的免疫共沉淀反应 | 第54-60页 |
·BCCIP 片段与内源性 PAK1IP1 的免疫共沉淀反应 | 第60-63页 |
·讨论 | 第63-66页 |
·小结 | 第66-67页 |
第4章 PAK1IP1蛋白表达下调模型的建立及PAK1IP1功能的初步研究 | 第67-84页 |
·材料和方法 | 第67-73页 |
·主要试剂及来源 | 第67页 |
·质粒和菌株 | 第67页 |
·逆转录病毒载体介导的 shRNA 抑制 PAK1IP1 基因表达 | 第67-70页 |
·PAK1IP1 基因表达下调后对细胞的影响 | 第70-72页 |
·统计学方法 | 第72-73页 |
·实验结果 | 第73-79页 |
·逆转录病毒载体介导的 shRNA 抑制 PAK1IP1 基因表达 | 第73-74页 |
·PAK1IP1 基因表达下调后对 BCCIP 的影响 | 第74-75页 |
·PAK1IP1 基因表达下调对细胞生长的影响 | 第75-76页 |
·对细胞放射敏感性的影响 | 第76-79页 |
·讨论 | 第79-82页 |
·shRNA 干扰技术抑制 PAK1IP1 基因表达 | 第79-81页 |
·PAK1IP1 基因表达下调后的功能研究 | 第81-82页 |
·小结 | 第82-84页 |
第5章 酵母双杂交系统筛选BCCIP的相互作用蛋白 | 第84-94页 |
·材料和方法 | 第84-88页 |
·主要试剂及来源 | 第84页 |
·质粒和菌株 | 第84页 |
·溶液和培养基的配制 | 第84-85页 |
·酵母感受态细胞的制备 | 第85-86页 |
·文库质粒 pACT-cDNA library 转化酵母感受态细胞 | 第86页 |
·阳性菌落的筛选 | 第86页 |
·酵母细胞质粒的提取 | 第86-87页 |
·酵母中提取的质粒转化 DH5α细胞 | 第87页 |
·PCR 筛选阳性克隆 | 第87页 |
·候选阳性文库质粒的小量提取 | 第87-88页 |
·小量提取质粒的单酶切鉴定 | 第88页 |
·质粒测序 | 第88页 |
·实验结果 | 第88-91页 |
·阳性克隆的初步筛选 | 第88-89页 |
·阳性克隆的筛选 | 第89-90页 |
·阳性文库质粒的测序 | 第90-91页 |
·讨论 | 第91-93页 |
·小结 | 第93-94页 |
第6章 结论 | 第94-95页 |
参考文献 | 第95-102页 |
作者简介及在学期间科研成果 | 第102-103页 |
致谢 | 第103页 |