| 中文目录 | 第1-7页 |
| 英文目录 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-37页 |
| 1 肿瘤坏死因子-α | 第12-26页 |
| ·简介 | 第12-16页 |
| ·TNF-α诱导细胞死亡 | 第16-23页 |
| ·NFκB能抑制TNF作为死亡配体的作用 | 第18-19页 |
| ·TNF通过TNFR1和TNFR2诱导细胞凋亡 | 第19-20页 |
| ·JNK是TNF诱导细胞凋亡的调节子 | 第20-23页 |
| ·TNF-α诱导细胞坏死 | 第23-26页 |
| ·诱导细胞坏死的信号转导通路 | 第24页 |
| ·RIP1在细胞坏死中的作用 | 第24-25页 |
| ·PARP-1在细胞坏死中的作用 | 第25页 |
| ·ROS在死亡受体介导的细胞坏死中的作用 | 第25-26页 |
| ·小结 | 第26页 |
| 2 ROS | 第26-29页 |
| ·ROS在TNF激活JNK中的作用 | 第27-28页 |
| ·ROS与TNF诱导激活NF-κB的关系 | 第28页 |
| ·ROS在TNFR1介导的细胞凋亡中的作用 | 第28-29页 |
| 3 铁蛋白 | 第29-33页 |
| ·铁蛋白的结构 | 第30-31页 |
| ·铁蛋白的表达调控 | 第31-32页 |
| ·铁蛋白和细胞内铁离子的自我平衡 | 第32-33页 |
| ·铁蛋白和氧化损伤 | 第33页 |
| 4 立题背景 | 第33-37页 |
| 第二章 材料和方法 | 第37-66页 |
| ·实验药品和试剂 | 第37页 |
| ·DNA相关实验及方法 | 第37-57页 |
| ·质粒载体 | 第37-41页 |
| ·pBluescript SK(-) | 第37-38页 |
| ·pcDNA6和pcDNA3 | 第38-40页 |
| ·kBF151 | 第40页 |
| ·pDisrup | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)感受态细胞的制备和DNA转化 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·DNA转化 | 第42页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第42-45页 |
| ·小规模质粒DNA的提取(STET煮沸法) | 第42-43页 |
| ·中等规模质粒DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·大规模质粒DNA的提取(CsCl超速离心法) | 第44-45页 |
| ·质粒DNA的工具酶处理 | 第45-46页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第45-46页 |
| ·线性DNA的末端平滑化 | 第46页 |
| ·线性DNA 5′端的磷酸化 | 第46页 |
| ·线性DNA 5′端磷酸基团的去除 | 第46页 |
| ·纯化DNA片段 | 第46-48页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第46-47页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第47-48页 |
| ·从溶液中回收DNA | 第48页 |
| ·DNA连接反应 | 第48页 |
| ·PCR相关实验 | 第48-52页 |
| ·普通PCR反应 | 第48-49页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第49页 |
| ·点突变 | 第49-50页 |
| ·3'RACE | 第50-52页 |
| ·实时PCR | 第52页 |
| ·哺乳动物细胞表达质粒的构建 | 第52-54页 |
| ·Ferritin全长及E62K/H65G突变体表达质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·κBF-Full ferritin、κBF-CDS ferritin和κBF-HA ferritin的构建 | 第53-54页 |
| ·凝胶迁移实验 | 第54-57页 |
| ·生物素标记探针 | 第54页 |
| ·抽提核蛋白 | 第54页 |
| ·配制非变性聚丙烯酰胺凝胶 | 第54页 |
| ·EMSA | 第54-57页 |
| ·细胞相关实验 | 第57-60页 |
| ·细胞培养 | 第57-58页 |
| ·细胞培养及相关溶液的配制 | 第57-58页 |
| ·细胞的传代和接种 | 第58页 |
| ·瞬时转染 | 第58-59页 |
| ·磷酸钙转染 | 第58-59页 |
| ·Lipofectamine 2000转染试剂转染 | 第59页 |
| ·TNF抗性细胞株的筛选鉴定 | 第59-60页 |
| ·逆转录病毒的包装 | 第59页 |
| ·TNF抗性细胞的筛选 | 第59-60页 |
| ·鉴定TNF抗性细胞中被失活的基因 | 第60页 |
| ·构建稳定表达细胞株 | 第60页 |
| ·用流式细胞仪分析细胞存活率和ROS | 第60-62页 |
| ·细胞存活率测定 | 第60-61页 |
| ·测定胞内ROS的积聚 | 第61-62页 |
| ·蛋白质相关实验方法 | 第62-64页 |
| ·样品制备 | 第62页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE电泳与Westem blotting分析 | 第62-64页 |
| ·铁离子相关实验 | 第64-66页 |
| ·细胞内铁含量的测定 | 第64-65页 |
| ·细胞内相对LIP的测定 | 第65-66页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第66-93页 |
| ·结果 | 第66-89页 |
| ·L929细胞内重链铁蛋白基因的破坏抑制TNF诱导细胞死亡 | 第66-70页 |
| ·Fer~(mut)细胞对TNF的抗性具有选择性 | 第70-73页 |
| ·zVAD增强TNF对Fer~(mut)细胞的细胞毒性 | 第73-75页 |
| ·重链铁蛋白缺失改变Fer~(mut)细胞内总铁离子含量和LIP基础水平 | 第75-76页 |
| ·LIP的上升与细胞内ROS的产生和细胞死亡相关 | 第76-80页 |
| ·Fer~(mut)细胞内储存铁含量少抑制TNF诱导的LIP上升 | 第80-82页 |
| ·重链铁蛋白在调节TNF诱导的LIP变化中起重要作用 | 第82-87页 |
| ·野生型L929细胞和Fer~(mut)细胞中NF-κB都能被TNF激活 | 第87-89页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-118页 |
| 图表索引 | 第118-120页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第120-124页 |
| 在学期间发表论文 | 第124页 |
