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香蕉枯萎病菌遗传多态性及绿色荧光蛋白基因转化的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一部分 前言第13-45页
 1 香蕉枯萎病研究综述第13-23页
   ·香蕉种植业在我国热区具有重要的经济地位第13页
   ·香蕉枯萎病症状、病原菌及生理小种第13-14页
   ·香蕉枯萎病的传播方式、分布及危害第14-16页
   ·香蕉枯萎病菌遗传多态性研究第16-17页
   ·香蕉枯萎病防治的研究第17-23页
 2 尖孢镰刀菌的遗传多态性研究第23-31页
   ·尖孢镰刀菌的专化型、小种和营养体亲和群第23-27页
   ·DNA 多态性与尖孢镰刀菌专化型中的 VCG、小种第27-31页
 3 丝状真菌的遗传转化系统第31-43页
   ·研究概况第31页
   ·选择标记和转化载体第31-32页
   ·用于转化的DNA第32-33页
   ·原生质体的制备第33页
   ·转化方法第33-35页
   ·转化 DNA 在受体中的整合方式第35-36页
   ·绿色荧光蛋白(GFP)在真菌研究中的应用第36-43页
 4 香蕉枯萎病研究中存在的问题,研究目的、意义、内容第43-45页
第二部分 香蕉枯萎病菌遗传多态性研究第45-65页
 1 材料和方法第45-54页
   ·香蕉枯萎病菌的生物学特性第45-47页
     ·材料第45页
     ·培养性状观察第45页
     ·温度对病菌菌丝体生长的影响第45页
     ·pH值对病菌菌丝体生长的影响第45-46页
     ·碳源对病菌菌丝体生长的影响第46页
     ·温度对分生孢子萌发的影响第46页
     ·pH 值对分生孢子萌发的影响第46-47页
   ·香蕉枯萎病菌的致病性及其 RAPD 分析第47-51页
     ·材料第47-48页
     ·致病性测定第48-49页
     ·菌丝的培养第49页
     ·基因组 DNA 的提取第49-50页
     ·扩增条件及产物分析第50-51页
   ·海南香蕉枯萎病菌的营养亲和群第51-54页
     ·材料第51-52页
     ·培养基第52页
     ·Nit 突变体(硝酸盐的营养突变体)的筛选第52页
     ·Nit 突变体类型的鉴定第52-53页
     ·亲和性测定第53-54页
 2 结果与分析第54-65页
   ·香蕉枯萎病菌的生物学特性第54-59页
     ·培养性状第54-55页
     ·温度对病菌菌丝体生长的影响第55页
     ·pH 值对病菌菌丝体生长的影响第55-56页
     ·碳源对病菌菌丝体生长的影响第56-57页
     ·温度对分生孢子萌发的影响第57-58页
     ·pH 值对分生孢子萌发的影响第58-59页
   ·香蕉枯萎病菌的致病性及其 RAPD 分析第59-63页
     ·致病性测定第59-60页
     ·随机引物PCR扩增结果第60-61页
     ·聚类分析结果第61-62页
     ·PCR 用于鉴定生理小种第62页
     ·RAPD 分析结果与菌株所属的生理小种、菌株的地理来源、菌株的致病性之间的关系第62-63页
   ·海南香蕉枯萎病菌的营养亲和群第63-65页
     ·Nit 突变体的筛选和鉴定第63页
     ·营养亲和性测定结果第63-65页
第三部分 绿色荧光蛋白基因转化香蕉枯萎病菌的研究第65-88页
 1 材料和方法第65-73页
   ·香蕉枯萎病菌原生质体形成与再生条件第65-67页
     ·材料第65页
     ·主要试剂第65页
     ·培养基第65页
     ·原生质的制备第65-66页
     ·原生质体形成各条件试验的设计第66页
     ·原生质体再生第66-67页
   ·绿色荧光蛋白基因转化香蕉枯萎病菌第67-73页
     ·菌株与质粒第67页
     ·质粒pCT74 转化入大肠杆菌第67-71页
     ·原生质体形成与再生第71-72页
     ·菌株对潮霉素 B(Hm B)的敏感性测定第72页
     ·DNA 操作与真菌转化第72页
     ·转化子对潮霉素 B 的抗性水平分析第72-73页
     ·转化子的荧光稳定性、菌落形态与菌丝生长速度第73页
     ·转化子的PCR鉴定第73页
     ·致病性测定第73页
 2 结果与分析第73-88页
   ·香蕉枯萎病菌原生质体形成与再生条件第73-80页
     ·菌丝菌龄对原生质体产量的影响第73-74页
     ·酶浓度对原生质体产量的影响第74-75页
     ·酶解时间对原生质体产量的影响第75页
     ·酶解温度对原生质体产量的影响第75-76页
     ·渗透压稳定剂种类对原生质体产量的影响第76页
     ·不同浓度的 NaCl 渗稳剂对原生质体产量的影响第76-77页
     ·原生质体形成方式的观察第77-78页
     ·渗透压稳定剂对原生质体再生率的影响第78-79页
     ·酶解时间对原生质体再生率的影响第79页
     ·原生质体的再生观察第79-80页
   ·绿色荧光蛋白基因转化香蕉枯萎病菌第80-88页
     ·质粒pCT74 转化入大肠杆菌第80-81页
     ·受体菌株对潮霉素的敏感性第81-82页
     ·DNA转化第82页
     ·转化子对潮霉素 B 的抗性水平第82-84页
     ·转化子的荧光稳定性、菌落形态与菌丝生长速度第84-86页
     ·转化子的 PCR 鉴定第86-87页
     ·致病性测定第87-88页
第四部分 结论与讨论第88-96页
 1 结论第88-90页
 2 讨论第90-96页
   ·香蕉枯萎病菌的生物学特性第90-91页
   ·香蕉枯萎病菌的生理小种、致病性及其 RAPD 分析第91-92页
   ·海南香蕉枯萎病菌的营养亲和群第92-94页
   ·香蕉枯萎病菌 PEG 介导转化系统第94页
   ·绿色荧光蛋白基因转化香蕉枯萎病菌第94-96页
参考文献第96-112页
致谢第112页

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