血红密孔菌漆酶的纯化及其基因在毕赤酵母中的表达
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-14页 |
| ·引言 | 第8页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第8-9页 |
| ·漆酶的应用 | 第9-10页 |
| ·造纸工业中的应用 | 第9页 |
| ·生物合成方面的应用 | 第9页 |
| ·食品工业中的应用 | 第9-10页 |
| ·环境保护中的应用 | 第10页 |
| ·生物监测中的应用 | 第10页 |
| ·漆酶基因的异源表达 | 第10-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第12页 |
| ·本课题来源及研究目的和意义 | 第12-14页 |
| ·课题来源 | 第12-13页 |
| ·研究目的和意义 | 第13-14页 |
| 2 血红密孔菌漆酶的纯化 | 第14-23页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·菌种 | 第14页 |
| ·药品 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·仪器 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15-16页 |
| ·培养方法 | 第15页 |
| ·样品制备 | 第15页 |
| ·漆酶活性及蛋白含量的测定 | 第15页 |
| ·纯化步骤 | 第15页 |
| ·凝胶电泳及光谱扫描 | 第15-16页 |
| ·N端氨基酸测序 | 第16页 |
| ·温度及pH值对漆酶活性和稳定性的影响 | 第16页 |
| ·动力学参数和抑制剂对漆酶活性的影响 | 第16页 |
| ·漆酶对染料的脱色实验 | 第16页 |
| ·结果与分析 | 第16-22页 |
| ·漆酶纯化结果 | 第16-18页 |
| ·N端氨基酸测序结果 | 第18-19页 |
| ·温度及pH值对漆酶活性和稳定性的影响 | 第19页 |
| ·动力学参数和抑制剂对漆酶活性的影响 | 第19-20页 |
| ·染料脱色结果 | 第20-22页 |
| ·本章小结 | 第22-23页 |
| 3 血红密孔菌漆酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第23-42页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·药品 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·血红密孔菌总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR分离扩增漆酶cDNA | 第26页 |
| ·重组质粒pPICZB/lac的构建及鉴定 | 第26-28页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第28-29页 |
| ·重组菌株的菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组菌株漆酶的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·漆酶活性测定 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-41页 |
| ·血红密孔菌总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR分离扩增漆酶cDNA | 第31-32页 |
| ·重组质粒pPICZB/lac的构建及鉴定 | 第32-37页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第37-38页 |
| ·重组菌株漆酶的诱导表达 | 第38-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
