| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 一、背景知识 | 第14-23页 |
| 1. 脊髓灰质炎病毒简介 | 第14-17页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·脊髓灰质炎病毒分类 | 第14页 |
| ·脊髓灰质炎病毒的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·脊髓灰质炎病毒的感染和复制 | 第15-17页 |
| ·脊髓灰质炎病毒的致病机制 | 第17页 |
| 2. 脊髓灰质炎防控现状 | 第17-21页 |
| ·概述 | 第17-18页 |
| ·脊髓灰质炎病毒疫苗 | 第18-19页 |
| ·疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎 | 第19-20页 |
| ·存在的问题和对策 | 第20-21页 |
| 3. 病毒拯救技术 | 第21-23页 |
| ·概述 | 第21页 |
| ·病毒拯救的 RNA 聚合酶表达系统 | 第21-22页 |
| ·核定位信号与病毒拯救 | 第22-23页 |
| ·脊髓灰质炎病毒拯救 | 第23页 |
| 二、论文设计 | 第23-26页 |
| 1. 论文目的和意义 | 第23-24页 |
| 2. 实验设计 | 第24-26页 |
| ·SARS 患者标本中 Sabin Ⅰ 病毒的发现和分离 | 第24页 |
| ·Sabin Ⅰ 病毒株在 SARS 患者中的流行病学分布 | 第24页 |
| ·Sabin Ⅰ 感染性克隆的构建及其病毒拯救 | 第24-26页 |
| 第二章 常用仪器试剂 | 第26-35页 |
| 一、主要仪器 | 第26页 |
| 二、主要试剂耗材和试剂盒 | 第26-28页 |
| 三、克隆质粒 | 第28-29页 |
| 四、常用试剂的配制 | 第29-30页 |
| 1. 磷酸缓冲液 | 第29页 |
| 2. 汉克斯液 | 第29页 |
| 3. LB 液体培养基 | 第29-30页 |
| 4. 电泳缓冲液 | 第30页 |
| 5. 结晶紫染液 | 第30页 |
| 五、常规实验方法 | 第30-35页 |
| 1. 患者标本处理 | 第30页 |
| 2. QIAamp Viral RNA Mini Kit 提取病毒 RNA | 第30-31页 |
| 3. Trizol 试剂提取组织标本病毒 RNA | 第31页 |
| 4. 转化感受态细菌及单克隆菌落的扩增培养 | 第31-32页 |
| 5. 质粒的小量提取 | 第32页 |
| 6. 质粒的中量提取 | 第32-33页 |
| 7. DNA 片段的纯化 | 第33页 |
| 8. QIAamp MinElute Virus Spin kit 提取病毒核酸 | 第33-35页 |
| 第三章 SARS 患者标本中 Sabin Ⅰ 病毒的发现和分离 | 第35-46页 |
| 一、材料与方法 | 第35-40页 |
| 1. 病毒接种 | 第35页 |
| 2. 微量法测定病毒滴度 | 第35-36页 |
| 3. 中和试验 | 第36页 |
| 4. 间接免疫荧光染色 | 第36页 |
| 5. 病毒 RNA 提取和逆转录反应 | 第36-37页 |
| 6. 引物设计及 PCR 扩增 | 第37-38页 |
| 7. 病毒 5′末端基因序列 RACE 扩增 | 第38-40页 |
| 8. PCR 扩增产物的克隆测序 | 第40页 |
| 二、结果 | 第40-43页 |
| 1. 病毒分离培养 | 第40页 |
| 2. 中和试验 | 第40-41页 |
| 3. 间接免疫荧光染色 | 第41-42页 |
| 4. 病毒分离株的全长基因序列扩增与克隆 | 第42-43页 |
| 5. 病毒分离株全基因组序列分析 | 第43页 |
| 三、讨论 | 第43-45页 |
| 四、小结 | 第45-46页 |
| 第四章 SARS患者标本中脊髓灰质炎病毒Sabin Ⅰ的检测 | 第46-53页 |
| 一、材料与方法 | 第46-49页 |
| 1 实验标本 | 第46-47页 |
| 2. 引物设计与合成 | 第47页 |
| 3. 病毒RNA的提取和逆转录反应 | 第47-48页 |
| 4. PCR扩增脊髓灰质炎病毒SabinⅠ核酸 | 第48-49页 |
| 5. PCR扩增鉴定SabinⅠ病毒核酸480位和2795 位突变 | 第49页 |
| 6. 统计学分析 | 第49页 |
| 二、结果 | 第49-51页 |
| 1. SARS患者标本中脊髓灰质炎病毒SabinⅠ检测 | 第49-51页 |
| 2. 脊髓灰质炎病毒SabinⅠ核酸480和2 795位点突变检测 | 第51页 |
| 三、讨论 | 第51-52页 |
| 四、小结 | 第52-53页 |
| 第五章 脊髓灰质炎病毒疫苗株 SabinⅠ全基因序列克隆的构建及鉴定 | 第53-62页 |
| 一、材料与方法 | 第53-58页 |
| 1. 病毒、质粒和试剂 | 第53页 |
| 2. 脊髓灰质炎病毒疫苗株 SabinI 全基因序列扩增引物的设计 | 第53-54页 |
| 3. SabinⅠ 病毒核酸的提取和逆转录 | 第54-55页 |
| 4. SabinⅠ病毒基因组各片段的扩增与鉴定 | 第55-56页 |
| 5. 扩增产物的纯化、克隆与鉴定 | 第56-57页 |
| 6. 全基因序列克隆载体的构建和鉴定 | 第57-58页 |
| 7. 27 95位点的点突变 | 第58页 |
| 二、结果 | 第58-60页 |
| 1. RT-PCR和扩增产物的克隆 | 第58页 |
| 2. 全基因序列克隆载体的构建和鉴定 | 第58-60页 |
| 3. 2795位点的体外突变 | 第60页 |
| 三、讨论 | 第60-61页 |
| 四、小结 | 第61-62页 |
| 第六章 脊髓灰质炎病毒 SabinⅠ 株感染性质粒的病毒拯救 | 第62-74页 |
| 一、材料与方法 | 第62-68页 |
| 1. 材料 | 第62页 |
| 2. 引物设计与合成 | 第62页 |
| 3. T7 RNA 聚合酶真核表达质粒的构建 | 第62-66页 |
| ·含核定位信号 T7 RNA 聚合酶基因的扩增 | 第62-64页 |
| ·不含核定位信号 T7 RNA 聚合酶基因的扩增 | 第64页 |
| ·T7 RNA 聚合酶基因真核表达质粒的构建 | 第64-66页 |
| 4. 质粒的中量提取 | 第66页 |
| 5. 拯救病毒的获得 | 第66-67页 |
| 6. 拯救病毒的鉴定 | 第67-68页 |
| 二、结果 | 第68-72页 |
| 1. 含核定位信号 T7 RNA 聚合酶基因的扩增 | 第68页 |
| 2. 不含核定位信号 T7 RNA 聚合酶基因的扩增 | 第68-69页 |
| 3. T7 RNA 聚合酶基因真核表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| 4. 脊髓灰质炎病毒 SabinⅠ 拯救病毒的获得与鉴定 | 第70-72页 |
| 三、讨论 | 第72-73页 |
| 四、小结 | 第73-74页 |
| 第七章 SabinⅠ3D 聚合酶区的突变及其病毒拯救 | 第74-81页 |
| 一、材料与方法 | 第74-76页 |
| 1 材料 | 第74页 |
| 2 引物设计 | 第74页 |
| 3 感染性质粒 p-SabinⅠ 3 D 区的突变 | 第74-75页 |
| 4 突变质粒 GS 的中量提取 | 第75页 |
| 5 突变前后 SabinⅠ 感染性质粒的病毒拯救比较 | 第75页 |
| 6 拯救病毒的鉴定 | 第75-76页 |
| 二、结果 | 第76-78页 |
| 1 感染性质粒 p-SabinⅠ 3D 区的突变 | 第76-77页 |
| 2 突变前后 SabinⅠ 感染性质粒的病毒拯救 | 第77页 |
| 3 拯救病毒的鉴定 | 第77-78页 |
| 三、讨论 | 第78-80页 |
| 四、小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-94页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
