| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 绪论 | 第11-22页 |
| ·前言 | 第11-12页 |
| ·地衣的抗旱特性 | 第12-13页 |
| ·干旱对地衣的影响 | 第12页 |
| ·地衣的抗旱机制 | 第12-13页 |
| ·其它真菌和植物抗旱基因的研究进展 | 第13-15页 |
| ·具有渗透调节作用的基因 | 第13-14页 |
| ·具有抗氧化胁迫作用的酶类 | 第14页 |
| ·保护生物大分子及膜结构的相关基因 | 第14-15页 |
| ·地衣分子生物学研究进展 | 第15-17页 |
| ·筛选地衣中抗性基因的几种方法 | 第15-16页 |
| ·全长cDNA 文库的意义和技术 | 第16-17页 |
| ·真菌基因组学的研究进展 | 第17-21页 |
| ·绝对定量PCR 方法测定地衣型真菌基因组大小的原理及意义 | 第18-20页 |
| ·相对定量PCR 方法测定基因拷贝数的原理及意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-41页 |
| ·材料及试剂 | 第22-26页 |
| ·地衣材料 | 第22页 |
| ·质粒载体及菌种 | 第22页 |
| ·酶及化学试剂 | 第22页 |
| ·培养基及试剂 | 第22-24页 |
| ·PCR 引物 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-28页 |
| ·CTAB 法提取地衣型真菌基因组DNA | 第26页 |
| ·PCR 扩增核糖体18S rRNA 序列验证提出的DNA | 第26-27页 |
| ·地衣型真菌总RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·全长cDNA 文库的构建过程 | 第28-34页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第28-29页 |
| ·LD-PCR 合成第二链cDNA 并扩增全长cDNA 双链 | 第29页 |
| ·蛋白酶K 消化 | 第29-30页 |
| ·限制性内切酶Sfi I 酶切 | 第30页 |
| ·cDNA 大小分级 | 第30-31页 |
| ·ds cDNA 连接载体pDNR-LIB | 第31页 |
| ·重组质粒电转化E.coli 中 | 第31-32页 |
| ·原始文库质量鉴定 | 第32页 |
| ·菌液PCR 检测 | 第32-33页 |
| ·原始文库的扩增 | 第33页 |
| ·全长cDNA 文库的初步筛选 | 第33-34页 |
| ·相对定量PCR 测定rRNA 基因的拷贝数 | 第34-35页 |
| ·原肌球蛋白（Tropomyosin-1）的表达及纯化 | 第35-41页 |
| ·原肌球蛋白TPM-1 全长基因的获得 | 第35页 |
| ·质粒DNA 的提取（按照Omega 质粒提取试剂盒说明） | 第35-36页 |
| ·表达载体的酶切 | 第36页 |
| ·凝胶回收DNA 片段（参照Omgea 试剂盒说明书） | 第36-37页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌BL21 热激转化 | 第37-38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳检测 | 第38-39页 |
| ·IPTG 诱导蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| ·蛋白质可溶性表达检测 | 第39-40页 |
| ·可溶性蛋白TPM-1 的分离纯化—金属螯合纯化 | 第40页 |
| ·可溶性蛋白TPM-1 的分离纯化—分子筛层析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-51页 |
| ·地衣型真菌Endocarpon pusillum 总RNA 的提取 | 第41页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第41-42页 |
| ·cDNA 的分级分离及检测 | 第42页 |
| ·文库的初步鉴定 | 第42-43页 |
| ·绝对定量PCR 计算基因组大小的结果 | 第43-46页 |
| ·相对定量PCR 测定rRNA 基因的重复单位 | 第46-48页 |
| ·原肌球蛋白（Tropomyosin-1）的序列分析 | 第48页 |
| ·IPTG 诱导蛋白浓度的测定 | 第48-49页 |
| ·蛋白可溶表达检测 | 第49-50页 |
| ·可溶蛋白TPM-1 的分离纯化 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| ·RNA 提取方法的比较 | 第51-52页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第52页 |
| ·准确定量模板浓度在荧光定量PCR 中的重要性 | 第52页 |
| ·绝对定量PCR 方法测定基因组大小 | 第52-53页 |
| ·相对定量PCR 方法测定rRNA 基因的拷贝数 | 第53页 |
| ·地衣型真菌的蛋白在E.coli 中的表达 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第66页 |
