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采用噬菌体展示技术淘选桔青霉素模拟表位的研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
前言第12-13页
第一章 综述第13-25页
   ·桔青霉素的研究进展第13-18页
     ·桔青霉素的生物学特性第13-14页
       ·桔青霉素的抑菌性第13页
       ·桔青霉素的毒性及其作用机理第13-14页
     ·桔青霉素的产生菌株及其分布第14-15页
     ·桔青霉素的检测分析方法第15-18页
       ·薄层层析法(Thin layer chromatography)第15-16页
       ·高效液相色谱法(High-performance liquid chromatography)第16页
       ·酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)第16-18页
   ·噬菌体展示技术及其研究进展第18-25页
     ·以单克隆抗体作为靶分子,确定相关的抗原表位第19-20页
     ·蛋白质结构分析第20-22页
     ·以细胞为靶分子,淘选出能结合细胞和器官的特异肽第22页
     ·疫苗研究第22-23页
     ·抗体库技术第23-25页
第二章 CIT噬菌体七肽模拟表位的淘选及应用第25-53页
   ·试剂与仪器第25-27页
   ·实验方法和步骤第27-39页
     ·CIT单克隆抗体的纯化第27-29页
       ·单克隆抗体的纯化第27-28页
       ·SDS-PAGE测定纯化后单克隆抗体的纯度第28页
       ·单克隆抗体的效价测定第28-29页
     ·桔青霉素模拟表位的淘选第29-35页
       ·受体菌E.coli ER2738生长曲线的测定第29-30页
       ·第一轮淘选第30-31页
       ·噬菌体滴度的测定第31页
       ·噬菌体的扩增和纯化第31-32页
       ·第二轮淘选第32-33页
       ·第三轮淘选第33-34页
       ·噬菌斑的扩增和纯化第34-35页
     ·桔青霉素模拟表位的鉴定第35-36页
       ·间接ELISA方法检测与抗体结合的阳性噬菌体克隆第35页
       ·间接竞争ELISA淘选CIT的模拟表位第35-36页
     ·阳性噬菌体克隆DNA模板的快速纯化、测序第36-37页
     ·CIT Phage-ELISA检测方法的建立第37-39页
       ·阳性噬菌体间接竞争ELISA标准曲线的建立第37-38页
       ·交叉反应率第38-39页
       ·饲料、玉米、大米CIT加标回收率测定第39页
       ·CIT Phage-ELISA与传统ELISA的比较研究第39页
   ·结果第39-53页
     ·抗CIT单克隆抗体的纯化第39-40页
     ·大肠杆菌E.COLI ER2738生长曲线的测定第40-41页
     ·亲和淘选结果第41页
     ·噬菌体阳性克隆的鉴定第41-45页
     ·阳性克隆DNA模板的快速纯化、测序第45-46页
     ·CIT Phage-ELISA检测方法的建立及应用第46-53页
       ·以CIT模拟表位建立Phage-ELISA检测方法的标准曲线第46-49页
       ·CIT Phage-ELISA检测方法的建立第49-50页
       ·CIT加标回收检测结果第50-51页
       ·CIT Phage-ELISA与传统ELISA的比较结果第51-53页
第三章 CIT噬菌体十二肽模拟表位的淘选及应用第53-67页
   ·试剂与仪器(同2.1)第53页
   ·实验方法和步骤(同2.2)第53页
   ·结果第53-67页
     ·亲和淘选结果第53页
     ·噬菌体阳性克隆的鉴定第53-59页
     ·阳性克隆DNA模板的快速纯化、测序第59-60页
     ·CIT Phage-ELISA检测方法的建立及应用第60-67页
       ·以CIT模拟表位建立Phage-ELISA检测方法的标准曲线第60-62页
       ·CIT Phage-ELISA检测方法的建立第62-63页
       ·CIT加标回收检测结果第63-65页
       ·CIT Phage-ELISA与传统ELISA的比较结果第65-67页
第四章 讨论第67-71页
   ·CIT模拟表位的亲和筛选影响因素第67-70页
     ·靶分子的纯度第67页
     ·肽库的选择第67-68页
     ·其它第68-70页
       ·去污剂及靶分子的浓度第68页
       ·封闭用蛋白质及其浓度的选择第68-69页
       ·结合时间和洗脱时间第69页
       ·噬菌体的数量第69-70页
   ·CIT PHAGE-ELISA检测方法第70-71页
第五章 小结第71-73页
致谢第73-74页
参考文献第74-80页
附录一第80-81页
攻读学位期间的研究成果第81页

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