谷氨酰t-RNA还原酶基因（hemA）的高效表达及其对5-ALA合成的影响
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| ·氨基乙酰丙酸的天然存在 | 第11页 |
| ·5-ALA的作用机理及其在农业生产中的应用 | 第11-15页 |
| ·5-ALA在植物中的作用机理 | 第11-13页 |
| ·促进光合作用 | 第11-12页 |
| ·影响呼吸作用 | 第12页 |
| ·促进植物组织分化 | 第12页 |
| ·启动细胞过氧化反应 | 第12-13页 |
| ·5-ALA在农业中的潜在应用 | 第13-15页 |
| ·用作新型农田除草剂 | 第13-14页 |
| ·植物生长调节剂 | 第14页 |
| ·无公害杀虫剂 | 第14-15页 |
| ·5-ALA与草坪草 | 第15页 |
| ·5-ALA在医学领域的应用 | 第15-17页 |
| ·5-ALA作为抗癌药物 | 第15-17页 |
| ·检验铅中毒的主要试剂 | 第17页 |
| ·5-ALA的生物合成途径 | 第17-21页 |
| ·碳四途径(Shemin pathway) | 第18-19页 |
| ·碳五途径((C5 pathway) | 第19-21页 |
| ·氨基乙酰丙酸的合成方法 | 第21-25页 |
| ·化学合成 | 第21-22页 |
| ·以马尿酸和琥珀酸为原料的合成工艺 | 第21页 |
| ·以吡啶,糠醛等杂环物质的衍生物为反应原料 | 第21-22页 |
| ·以乙酰丙酸及其衍生物为原料 | 第22页 |
| ·生物合成 | 第22-25页 |
| ·诱变育种法 | 第22-24页 |
| ·基因工程菌生产5-ALA | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| 第二章 试验研究 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第26页 |
| ·生化试剂与分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·实验所需各种酶 | 第26页 |
| ·枯草杆菌hemA基因序列 | 第26页 |
| ·主要试剂盒 | 第26页 |
| ·培养基及溶液 | 第26-28页 |
| ·大肠杆菌和枯草杆菌生长培养基 | 第26-27页 |
| ·抗生素用量(终浓度) | 第27页 |
| ·主要溶液与缓冲液的配制 | 第27-28页 |
| ·主要的仪器设备见表2-1 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-39页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第29页 |
| ·枯草杆菌基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增谷氨酰t-RNA还原酶基因 | 第30页 |
| ·DNA片段的纯化回收 | 第30-31页 |
| ·酶切体系与连接体系 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·所需要的溶液 | 第31页 |
| ·操作步骤 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞DNA转化 | 第32页 |
| ·蛋白质的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-34页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·细胞抽提物的制备 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE上样样品制备 | 第33页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的灌制 | 第33-34页 |
| ·考马斯亮蓝对SDS聚丙烯酰胺凝胶进行染色 | 第34页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第34-37页 |
| ·Ni2+亲和柱的制备 | 第34-36页 |
| ·溶液配制 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·氨基乙酰丙酸的分析 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·分析步骤 | 第38页 |
| ·卟啉类物质的定性检测 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-49页 |
| ·载体的构建 | 第39-41页 |
| ·蛋白质的表达 | 第41-43页 |
| ·谷氨酰t-RNA还原酶的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·谷氨酰t-RNA还原酶的纯化 | 第42页 |
| ·氨基乙酰丙酸的产量测定 | 第42-43页 |
| ·卟啉类物质定性检测 | 第43页 |
| ·重组菌生产5-ALA发酵条件的初步研究 | 第43-49页 |
| ·培养基的优化 | 第44-45页 |
| ·诱导条件的选择 | 第45-47页 |
| ·诱导时机的选择 | 第45-46页 |
| ·诱导剂浓度对5-ALA产量的影响 | 第46页 |
| ·诱导温度对5-ALA产量的影响 | 第46-47页 |
| ·培养方式的选择 | 第47-49页 |
| ·接种量对5-ALA产量的影响 | 第47-48页 |
| ·摇瓶装液量对5-ALA产量的影响 | 第48-49页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第49-55页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·结论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
