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NPK1和NPR1基因的克隆及其转化辣椒的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
第一章文献综述第11-28页
   ·辣椒基因工程研究进展第11-16页
     ·辣椒离体再生研究进展第11-13页
     ·辣椒遗传转化研究进展第13-15页
       ·抗病毒病第13页
       ·抗真菌病第13-14页
       ·抗细菌病第14页
       ·抗除草剂第14页
       ·抗虫基因工程第14-15页
     ·辣椒基因工程中存在的主要问题第15-16页
       ·辣椒植株再生第15页
       ·遗传转化率低第15-16页
       ·转化方法单一第16页
   ·植物抗病基因工程第16-21页
     ·基因对基因假说(gene-for-gene hypothesis)第16-17页
     ·系统性抗性第17-21页
       ·系统获得性抗性(systemic acquired resistance, SAR)第17-18页
       ·诱导性系统抗性(Inducing System Resistance, ISR)第18-19页
       ·植物抗病信号传导途径及其相互作用第19-21页
       ·NPR1 在植物抗病中的作用第21页
   ·植物抗旱基因工程研究第21-27页
     ·渗透保护物质(Osmoprotectant) 生物合成的关键酶基因第23页
     ·脯氨酸( Proline) 生物合成的相关基因第23页
     ·糖类物质生物合成的相关基因第23-24页
     ·多元醇生物合成相关基因第24页
     ·多胺(Polyamine)第24页
     ·胚胎后期发生富集蛋白基因第24-25页
     ·编码转录因子的调节基因第25页
     ·抗氧化和毒性降解酶相关基因第25-26页
     ·MAPK 研究进展第26-27页
   ·研究的目的及意义第27-28页
第二章材料与方法第28-36页
   ·材料第28-29页
     ·植物材料第28页
     ·菌株与质粒第28页
     ·主要试剂第28页
     ·培养基与溶液第28-29页
   ·方法第29-36页
     ·辣椒再生体系的建立第29-30页
       ·无菌苗的制备第29页
       ·不定芽的诱导和分化第29页
       ·不定芽的伸长第29页
       ·生根与移栽第29-30页
     ·烟草NPK1 基因及拟南芥NPR1 基因的克隆第30-31页
       ·拟南芥和烟草DNA 的提取第30页
       ·聚合酶链式反应第30-31页
       ·DNA 序列分析第31页
     ·载体构建第31-33页
       ·玻璃粉法回收DNA 片段第31页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第31-32页
       ·质粒DNA 的提取第32页
       ·冻融法将中间载体导入农杆菌第32-33页
     ·NPK1 基因和NPR1 基因导入辣椒第33-34页
       ·外植体Km 抗性测定第33页
       ·农杆菌转染第33页
       ·转化植株的再生第33页
       ·植株的PCR 检测第33-34页
     ·烟草NPK1 导入拟南芥第34-36页
       ·农杆菌介导的遗传转化(花序浸染法)第34页
       ·抗性植株的筛选和转基因植株的PCR 检测第34页
       ·转基因植株抗旱相关生理指标的测定第34-36页
第三章 结果与分析第36-45页
   ·辣椒再生体系的建立第36-39页
     ·不定芽的诱导及分化第36-38页
       ·辣椒不同基因型对不定芽诱导分化的影响第36页
       ·不同激素及配比对辣椒不定芽诱导与分化的影响第36-37页
       ·不同外植体对不定芽诱导与分化的影响第37-38页
       ·AgNO_3对不定芽诱导的影响第38页
     ·不定芽的伸长第38页
     ·生根及移栽成苗第38-39页
   ·NPK1 和NPR1 基因的克隆及表达载体的构建第39页
   ·NPK1 基因和NPR1 基因转化辣椒第39-41页
     ·外植体Km 抗性测定第39页
     ·农杆菌的转染第39-40页
     ·转基因植株的PCR 检测第40-41页
   ·烟草NPK1 转化拟南芥第41-45页
     ·拟南芥转基因植株的检测第41-42页
       ·抗性植株筛选第41-42页
       ·抗性植株的PCR 检测第42页
     ·转基因植株抗旱性鉴定第42-45页
       ·干旱对丙二醛(MDA)含量的影响第42-43页
       ·干旱胁迫下脯氨酸含量的变化第43-45页
第四章 讨论第45-49页
   ·辣椒再生体系的建立第45-46页
     ·激素和有机成分的使用第45页
     ·品种、外植体类型及苗龄的影响第45-46页
     ·AgNO_3 的影响第46页
   ·NPK1 和NPR1 基因的克隆及表达载体的构建第46页
     ·拟南芥NPR1 基因第46页
     ·烟草NPK1 基因第46页
   ·NPK1 基因和NPR1 基因转化辣椒第46-47页
     ·外植体Km 抗性测定第46-47页
     ·辣椒转NPK1 和NPR1 基因植株的获得第47页
   ·烟草NPK1 导入拟南芥第47-48页
     ·NPK1 基因转入拟南芥第47页
     ·转基因植株的抗旱性鉴定第47-48页
   ·存在问题及下一步工作第48-49页
第五章 结论第49-50页
参考文献第50-56页
附录1第56-59页
附录2第59-60页
附录3第60-61页
附录4第61-62页
附录5第62-63页
致谢第63-64页
作者简历第64页

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